应用双功能嵌合肽修饰钛种植体表面抑制生物膜形成的研究

发布时间：2023-04-20 01:20

　　目的:口腔种植体表面形成的细菌生物膜(biofilm)易引起种植体周围疾病的发生,最终可导致种植体脱落、种植失败。种植体表面初期附着链球菌是生物膜形成的基础,因此抑制种植体表面链球菌的初期粘附及干扰后续生物膜形成,有利于种植初期骨结合的形成,实现种植体初期稳定性。人类β-防御素-3(human beta-defensin3,h BD-3)是一种人体产生的阳离子抗菌肽,具有广谱的抗菌性能。特异性钛结合肽:RKLPDAGPMHTW(Ti-binding peptide-l,TBP-l)可特异性识别钛并与其表面稳定结合。本研究将源于h BD-3的3个片段通过3个甘氨酸(G)连接链与TBP-1合成3段嵌合肽(TBP-1-GGG-h BD3-1、TBP-1-GGG-h BD3-2、TBP-1-GGG-h BD3-3),既能吸附在钛片表面又能有效地发挥抗菌作用,且不易产生耐药性,实现步骤简单过程环保的种植体表面改性。应用双功能嵌合肽修饰钛片表面,并对改性后的表面进行性质表征以及对体外细胞学和细菌学等效应进行评价,以期获得提高种植体成功率的改良种植体。方法:1.嵌合肽的基本性质和抗菌性能的检测:通过...

【文章页数】：113 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、嵌合肽基本性质和抗菌性能的检测
    1.1 对象和方法
        1.1.1 实验材料
        1.1.2 实验仪器
        1.1.3 嵌合肽合成及溶液制备
        1.1.4 嵌合肽理化特性及二级结构分析
            1.1.4.1 软件预测
            1.1.4.2 拉曼光谱检测
            1.1.4.3 圆二色光谱(CD)检测
        1.1.5 嵌合肽抗菌特性的检测
            1.1.5.1 培养基配制
            1.1.5.2 细菌冻干粉的复苏及冻存
            1.1.5.3 细菌冻存液复苏及菌悬液制备
            1.1.5.4 细菌最小抑菌浓度和最小杀菌浓度的测定
            1.1.5.5 生物膜易感性实验
        1.1.6 统计学分析
    1.2 结果
        1.2.1 嵌合肽理化特性及二级结构预测结果
        1.2.2 圆二色光谱(CD)和拉曼光谱实验结果
        1.2.3 嵌合肽最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度实验(MBC)结果
        1.2.4 生物膜敏感性实验结果
    1.3 讨论
    1.4 小结
二、嵌合肽修饰钛片表面抗菌性能表征
    2.1 对象和方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 嵌合肽修饰钛片表面后的表征观察
            2.1.3.1 光滑钛片的制备
            2.1.3.2 嵌合肽修饰钛片样本的制备
            2.1.3.3 X射线光电子能谱分析嵌合肽修饰钛片表面元素组成
        2.1.4 嵌合肽修饰钛片表面后抗菌性检测
            2.1.4.1 链球菌培养基配制
            2.1.4.2 链球菌菌悬液配制
            2.1.4.3 激光共聚焦电子显微镜实验
            2.1.4.4 抗菌效率(R)实验
            2.1.4.5 扫描电子显微镜(SEM)实验
            2.1.4.6 透射电子显微镜(TEM)实验
        2.1.5 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验
            2.1.5.1 RNA的提取
            2.1.5.2 琼脂糖凝胶电泳实验
            2.1.5.3 反转录实验
            2.1.5.4 qRT-PCR实验
        2.1.6 统计学分析
    2.2 结果
        2.2.1 嵌合肽在钛片样本表面的吸附情况
        2.2.2 TBP-1-GGG-hBD3-3修饰钛片样本抗菌性检测结果
            2.2.2.1 激光共聚焦电子显微镜实验结果
            2.2.2.2 抗菌效率(R)实验结果
            2.2.2.3 SEM和TEM结果
            2.2.2.4 TBP-1-GGG-hBD3-3对基因sspA和sspB表达的影响
    2.3 讨论
    2.4 小结
三、嵌合肽体外生物相容性评价
    3.1 对象和方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验仪器
        3.1.3 嵌合肽对MC3T3-E1成骨细胞毒性检测试验
            3.1.3.1 MC3T3-E1成骨细胞培养相关试剂配制
            3.1.3.2 MC3T3-E1成骨细胞复苏、培养及冻存
            3.1.3.3 CCK-8检测MC3T3-E1细胞增殖实验
            3.1.3.4 AO/EB荧光染色
        3.1.4 统计学分析
    3.2 结果
        3.2.1 嵌合肽的生物相容性检测结果
            3.2.1.1 CCK-8检测成骨细胞增殖实验结果
            3.2.1.2 AO/EB荧光染色实验结果
    3.3 讨论
    3.4 小结
全文结论
论文创新点
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述 抗菌肽机制的相关研究
    综述参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3794596