MicroRNA-300通过靶向骨膜蛋白参与成釉细胞瘤骨质破坏的研究

发布时间：2023-04-27 22:58

　　目的:成釉细胞瘤(ameloblastoma,AB)是口腔颌面部最常见的牙源性肿瘤,约占60%以上。AB虽属良性肿瘤,但具有交界性肿瘤的性质。AB多发于青壮年,以下颌体及下颌角部常见。初期患者多无自觉症状,随着病情进展,颌骨逐渐膨大,造成畸形,肿瘤最终可穿透骨质,周围软组织遭受侵犯。AB最重要的生物学特性是具有局部侵袭性。目前,针对AB仅限于外科手术治疗,但术后容易导致复发,复发多次还可能发生恶变甚至远处转移,患者的生存质量受到严重的影响。因此,准确揭示AB的发病机制,将会为AB的预防以及探寻新的治疗途径提供理论指导。微小RNA(microRNA,miRNA)是广泛存在于真核生物中的一组长度大概为22个核苷酸的非编码单链RNA家族,其通常在转录后水平调控基因的翻译表达。有报道表明miRNA广泛存在于各种真核细胞中,参与机体的生长发育、细胞凋亡、脂肪代谢等过程。同时,miRNA在肿瘤的发生发展中也发挥着至关重要的作用。miR-300是一类新发现的miRNA,目前对其研究较少,之前的文献对于miR-300的报道更多集中在血液病中。本实验将对miR-300的研究转移到肿瘤的发病机制中,探讨其...

【文章页数】：84 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分:miRNA-300、Periostin在临床成釉细胞瘤组织中的研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 组织标本
            2.1.2 芯片
            2.1.3 主要试剂
            2.1.4 实验设备
        2.2 实验方法
            2.2.1 miRNA芯片分析
            2.2.2 茎环实时定量PCR方法
            2.2.3 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法
            2.2.4 Western Blot方法
            2.2.5 免疫组织化学染色SP法
        2.3 统计分析
    3 结果
        3.1 miRNA芯片结果分析
        3.2 qRT-PCR检测miR-300、Periostin的表达
        3.3 Western blot检测Periostin的表达
        3.4 免疫组化检测Periostin的表达
    4 讨论
第二部分:miR-300、Periostin对成釉细胞瘤细胞生物学特性的影响
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 所用细胞系
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 实验设备
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞培养、传代、冻存、复苏
            2.2.2 miR-300 mimics、miR-300 inhibitor的设计和合成
            2.2.3 Periostin si RNA的设计和合成
            2.2.4 脂质体转染法转染
            2.2.5 MTS法
            2.2.6 平板克隆形成实验
            2.2.7 流式细胞仪检测细胞凋亡
            2.2.8 流式细胞仪检测细胞周期
            2.2.9 Transwell侵袭实验
            2.2.10 双荧光素酶活性检测
        2.3 统计分析
    3 结果
        3.1 miR-300对AM-1细胞功能的影响
            3.1.1 miR-300 mimics、inhibitor转染效率的检测
            3.1.2 miR-300对AM-1细胞增殖的影响
            3.1.3 miR-300对AM-1细胞凋亡的影响
            3.1.4 miR-300对AM-1细胞周期的影响
            3.1.5 miR-300对AM-1细胞侵袭的影响
        3.2 miR-300靶向调控Periostin的研究
            3.2.1 miR-300与Periostin靶向关系生物学信息预测
            3.2.2 过表达miR-300对AM-1细胞表达Periostin的影响
            3.2.3 抑制miR-300对AM-1细胞表达Periostin的影响
            3.2.4 双荧光素酶活性检测实验验证miR-300与Periostin 3'UTR结合情况
        3.3 Periostin对AM-1细胞功能的影响
            3.3.1 Periostin转染效率的检测
            3.3.2 si-Periostin对AM-1细胞增殖的影响
            3.3.3 si-Periostin对AM-1细胞凋亡的影响
            3.3.4 si-Periostin对AM-1细胞周期的影响
            3.3.5 si-Periostin对AM-1细胞侵袭的影响
    4 讨论
第三部分:miR-300调控Periostin参与成釉细胞瘤骨质破坏的机制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 所用细胞系
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 实验设备
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 细胞转染
            2.2.3 实时定量PCR
            2.2.4 Western-blot
        2.3 统计分析
    3 结果
        3.1 miR-300 在各组细胞中的表达
        3.2 OPG、Rankl、C-fos在各组细胞中的表达
    4 讨论
结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3803232