低氧对血清剥夺前后山羊颞下颌关节盘细胞自噬和凋亡的影响及作用

发布时间：2023-10-11 20:57

　　第一部分:血清剥夺对于山羊颞下颌关节盘细胞凋亡和自噬的影响目的:模拟生理颞下颌关节盘(temporomandibular joint disc,TMJ disc)的低血供状态,通过检测血清剥夺后山羊颞下颌关节盘细胞自噬和凋亡的变化,探索颞下颌关节盘细胞自噬和凋亡的关系。方法:无菌分离培养3-6月龄山羊颞下颌关节盘细胞,取P2代细胞进行实验。倒置显微镜下观察血清剥夺前后细胞的形态学变化,苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色观察细胞的形态学改变,通过荧光染色Hoechst33258观察细胞凋亡的发生以及丹磺酰戊二胺(monodansylcadaverine,MDC)荧光染色检测细胞的溶酶体活性。MTT检测细胞的吸光度值并绘制生长曲线。流式细胞术检测细胞的自噬率和凋亡率,实时荧光定量聚合酶链反应(real time PCR,RT-PCR)检测自噬相关基因Beclin1和LC3II的变化,最后加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA),通过观察细胞的凋亡变化探索细胞自噬和凋亡之间的关系。结果:血清剥夺后山羊TMJ关节盘细胞皱缩,由长梭形变为...

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略词表
第一章 绪论
    1.1 颞下颌关节概述
        1.1.1 颞下颌关节
        1.1.2 颞下颌关节盘
        1.1.3 颞下颌关节紊乱病
    1.2 颞下颌关节盘细胞的死亡方式
        1.2.1 凋亡
        1.2.2 自噬
        1.2.3 坏死
    1.3 低氧概述
    1.4 选题依据及研究思路
第二章 无血清培养对山羊颞下颌关节盘细胞凋亡和自噬的影响.
    2.1 概述
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验动物
        2.2.2 主要试剂
        2.2.3 主要仪器
        2.2.4 主要试剂配制
    2.3 实验方法
        2.3.1 山羊颞下颌关节盘细胞的分离与培养的操作方法
        2.3.2 山羊颞下颌关节盘细胞传代
        2.3.3 MTT测山羊颞下颌关节盘细胞的生长曲线
        2.3.4 HE染色步骤
        2.3.5 Hoechst33258染色
        2.3.6 Dansylcadaverine染色
        2.3.7 流式细胞仪检测山羊颞下颌关节盘细胞的凋亡率
        2.3.8 流式细胞仪检测山羊颞下颌关节盘细胞的自噬率
        2.3.9 PCR检测自噬相关基因的表达
        2.3.10 统计学分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 镜下观察山羊颞下颌关节盘细胞的形态学变化
        2.4.2 山羊颞下颌关节盘细胞生长曲线绘制
        2.4.3 流式细胞仪检测山羊颞下颌关节盘细胞的自噬率
        2.4.4 PCR检测山羊颞下颌关节盘细胞自噬相关基因的表达
        2.4.5 流式细胞仪检测山羊颞下颌关节盘细胞的凋亡率
    2.5 讨论
    2.6 结论
第三章 低氧对山羊颞下颌关节盘细胞凋亡和自噬的影响
    3.1 概述
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验动物
        3.2.2 主要试剂
        3.2.3 主要仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 山羊颞下颌关节盘细胞的分离、培养
        3.3.2 实验分组
        3.3.3 流式细胞仪检测山羊颞下颌关节盘细胞的凋亡率
        3.3.4 流式细胞仪检测山羊颞下颌关节盘细胞的自噬率
        3.3.5 PCR检测自噬相关基因的表达
        3.3.6 统计学分析
    3.4 实验结果
        3.4.1 流式细胞仪检测山羊颞下颌关节盘细胞的自噬率
        3.4.2 PCR检测山羊颞下颌关节盘细胞自噬相关基因的表达
        3.4.3 流式细胞仪检测山羊颞下颌关节盘细胞的凋亡率
    3.5 讨论
    3.6 结论
第四章 全文总结
参考文献
在学期间的研究成果
致谢
临床病例



本文编号：3852777