骨形态发生蛋白-2、-4、-6、-7和-9差异性介导永生化成牙本质细胞成骨分化

发布时间：2023-10-21 13:43

　　目的:研究永生化成牙本质细胞(immortalized odontoblasts,i ODs)的间充质干细胞表型和骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein, BMP)-2、-4、-6、-7和-9差异介导i ODs成骨分化的作用。方法:使用SV40 T抗原永生化成牙本质细胞(odontoblasts),建立i OD细胞株,并连续检测BMP的内源性表达。使用Ad-Easy技术合成表达BMP和GFP的重组腺病毒,使用MTT试剂盒检测i OD的增殖能力。通过免疫荧光检测i OD的间充质干细胞表面标志物。在体外,使用半定量RT-PCR、碱性磷酸酶活性、茜素红染色及油红O染色检测i OD的成骨和成脂分化能力。最后,使用micro-CT和组织学分析评估体内形成的异位矿化组织的体积和密度。采用SPSS 21.0软件包中的单因素方差分析和Scheffe的多重比较检验对结果进行分析。结果:SV40 T抗原有效地永生化OD。i OD细胞株保持良好的增殖活性,表达间充质干细胞表面标志物并具有多向分化能力。相比BMP-4、-6和-7,BMP-2和BMP-9具有更强的介导i OD的成骨...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 化学材料、细胞培养和ODs的永生化
    1.2 表达BMP和绿色荧光蛋白（GFP）的重组腺病毒的产生、扩增和转染
    1.3 结晶紫染色和MTT增殖测定
    1.4 免疫荧光染色
    1.5 RNA分离和半定量RT-PCR检测
    1.6 碱性磷酸酶（ALP）活性测定
    1.7 基质矿化测定（茜素红S染色）
    1.8 油红O染色
    1.9 BMPs转染的iOD植入和异位矿化组织形成实验
    1.1 0 微型计算机体层扫描（micro-CT）分析
    1.1 1 组织学评估以及阿尔辛蓝和三色染色
    1.1 2 统计学分析
2 结果
    2.1 iOD的增长率高于OD
    2.2 i ODs表达MSC标志物
    2.3 iOD中BMP的内源表达
    2.4 在BMP刺激下，iOD可以分为成骨和成脂谱系
    2.5 BMPs差异诱导iODs异位矿化组织的形成
3 讨论



本文编号：3855946