纳米级钛颗粒抑制大鼠牙槽骨骨髓间充质干细胞增殖的研究

发布时间：2024-02-03 20:45

　　目的本研究旨在探讨种植体脱落纳米级钛颗粒对牙槽骨骨髓间充质干细胞(Al-BMSCs增殖的影响及机制。方法分离培养大鼠牙槽骨来源的Al-BMSCs,与纳米级钛颗粒共培养后,台盼蓝染色细胞计数法及CCK8法检测细胞增殖。Al-BMSCs转染荧光素酶标记的4XSBE质粒与纳米级钛颗粒共培养后,通过检测荧光素酶活性及ELISA法检测TGF-β1表达水平,评估TGF-β信号通路活性。PCR检测Smad7表达水平。通过转染特异性siRNA敲减Al-BMSCs中Smad7表达水平,与纳米级钛颗粒共培养后,观察Al-BMSCs增殖及TGF-β信号通路活性。结果纳米级钛颗粒明显抑制Al-BMSCs增殖及TGF-β信号通路活性。ELISA检测发现,Al-BMSCs的TGF-β1分泌水平无明显改变。PCR检测发现Smad7表达上调。利用siRNA敲减Al-BMSCs中Smad7的表达后发现,纳米级钛颗粒对Al-BMSCs增殖及TGF-β信号通路活性的抑制减弱。结论纳米级钛颗粒通过上调Smad7抑制TGF-β信号通路活性及大鼠Al-BMSCs增殖。

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图2检测大鼠Al-BMSCs不同时间点细胞增殖A:台盼蓝染色计数法;B:CCK8法

5.敲减Smad7可阻断纳米级钛颗粒对AlBMSCs增殖的抑制作用图3TGF-β信号通路活性检测A:报告基因4XSBE荧光素酶活性;B:细胞上清液TGF-β1含量

图3TGF-β信号通路活性检测A:报告基因4XSBE荧光素酶活性;B:细胞上清液TGF-β1含量

图2检测大鼠Al-BMSCs不同时间点细胞增殖A:台盼蓝染色计数法;B:CCK8法Smad7siRNA转染Al-BMSCs后，细胞内Smad7基因(图5A)和蛋白(图5B)表达水平明显降低。利用荧光素酶报告质粒4XSBE转染敲减Smad7的Al-BMSCs，与纳米级钛颗粒共培....

图1大鼠Al-BMSCs原代培养及体外成骨诱导培养(×200)A:原代Al-BMSCs光学显微镜下图;B:Al-BMSCs体外培养1周后Msaon染色;C:Al-BMSCs成骨诱导分化2周后vonKossa染色

Smad7siRNA转染Al-BMSCs后，细胞内Smad7基因(图5A)和蛋白(图5B)表达水平明显降低。利用荧光素酶报告质粒4XSBE转染敲减Smad7的Al-BMSCs，与纳米级钛颗粒共培养，发现Smad7敲减的Al-BMSCs中4XSBE荧光素酶报告基因活性明显提高（P....

图6检测敲减Smad7基因的大鼠AL-BMSCs增殖

TGF-β信号通路在细胞增殖分化中发挥核心调节作用。当TGF-β配体与一型和二型受体结合后，二型受体磷酸化一型受体，进而导致胞内信号中间体Smad2和Smad3磷酸化。磷酸化的Smad2和Smad3进一步结合Smad4,共同进入细胞核，启动下游目的基因表达，进而发挥生物学作用[2....

本文编号：3894652