转基因番茄防龋疫苗对BALB/c小鼠T、B淋巴细胞群数量的影响

发布时间：2024-03-16 21:21

　　目的:通过检测转基因番茄口服防龋疫苗免疫后BALB/c小鼠脾脏内T、B淋巴细胞亚群占总T、B淋巴细胞的百分率,分析各组间T、B淋巴细胞亚群数量的差异,初步探索转基因番茄防龋疫苗在小鼠体内发挥免疫作用的作用机制。方法:1、制备PAcA蛋白抗原及兔多克隆抗体,培育T₂代转基因番茄植株,应用PCR、Western blot、ELISA等技术对T₂代转基因番茄果实进行鉴定,并检测T₂代转基因番茄中融合蛋白的表达含量。2、将18只雄性、6周龄BALB/c小鼠按随机分组原则分成3组:空白组(正常饲养)、阴性对照组(正常番茄汁)、实验组(T₂代转基因番茄汁),每组6只,经灌胃免疫4周(每周1次)后,ELISA法检测唾液中SIgA和血清中IgG抗体滴度;在首次免疫后5周时,取各组小鼠脾脏,制成单细胞悬液,流式细胞仪检测各组小鼠脾脏内T、B淋巴细胞亚群分别占总T、B淋巴细胞的百分率,分析比较各组间亚群数量的差异。结果:1、经亲和层析法纯化得到纯化的PAcA蛋白,并测得PAcA蛋白浓度为2.19 mg/mL。2、将T<...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2-1含pET30a-PAcA质粒的菌液PCRM:BM2000DNAMarker；1-12：菌液1-12#pacA-扩增产物

硕士学位论文PCR及质粒测序鉴定含重组质粒pET30a-PAcA菌察到菌液1#-12#均在约1200bp处出现特异性条带，与预计是含有目的基因的阳性菌落。（图2-1）

图2-2质粒pET30a-PacA测序鉴定

确定是含有目的基因的阳性菌落。（图2-1）图2-1含pET30a-PAcA质粒的菌液PCRM:BM2000DNAMarker；1-12：菌液1-12#pacA-扩增产物（2）质粒测序结果经NCBINucleotideBLAST比对，序列同源性为100....

图2-3BL21/pET30a-PAcA蛋白纯化

士学位论文蛋白纯化产物经纯化柱过滤后，SDS-PAGE电泳显示泳道3、4内条带，说明质粒内的his标记基因与Ni-琼脂糖凝胶纯化AcA蛋白为可溶性蛋白。此结果还表明，NTA-40缓冲液而基本不影响PAcA蛋白的特异性结合。PAcA蛋白可液中被有效洗脱，....

图2-4PAcA蛋白的Westernblot鉴定结果

图2-3BL21/pET30a-PAcA蛋白M：彩虹180广谱蛋白Marker；1：2、NTA-80；3：NTA-100；4：N5、NTA-300；6、NTA-400；7、Nesternblot鉴定SDS-PAGE电泳后，湿转至PVD抗体作为一抗，HRP....

本文编号：3930105