HIF-1α慢病毒载体的构建及其在骨髓基质干细胞内表达的检测

发布时间：2024-06-10 21:56

　　目的构建HIF-1α(Hypoxia inducible factor1α,(?)氧诱导因子-1α)的慢病毒载体(Lenti-HIF-lα),转染骨髓基质干细胞(Bone marrow stromal cells,BMSCs)后,检测HIF-1α在BMSCs内的不同时间点的表达及其位置的鉴定。 方法根据野生型人源的HIF.1α基因(NM₀01530)序列设计引物及序列片段的PCR扩增,将目的基因PCR产物连接到载体pEGFP-N1上,构建真核表达载体pEGFP-N1-HIF-1α,挑选阳性克隆进行测序鉴定,然后将目的基因PCR产物和目的载体pEGFP-N1用NheI和BamHI分别进行酶切,经凝胶电泳进行pEGFP-N1-HIF-1α重组载体菌落PCR鉴定,鉴定重组质粒中的HIF-1α目的基因。采用LR重组系统将目的序列重组到慢病毒载体plenti6.3V5-DEST上,构建慢病毒载体Lenti.HIF-1α(Lenti-LacZ为对照组)。取细胞状态良好,处于对数生长期的293T细胞,用构建的慢病毒表达载体pEGFP-N1-HIF-1α-IRES-GRP及包装质...

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中文摘要
Abstract
1 引言
2 实验材料与方法
3 实验结果
4 讨论
5 结论
6 参考文献
附录
致谢
综述
    参考文献



本文编号：3991955