醋酸棉酚对人舌鳞癌Tca8113细胞MGMT和hMLH1基因蛋白及mRNA表达的影响

发布时间：2025-01-15 17:20

　　目的：观察体外应用醋酸棉酚(GAA)对人舌鳞癌Tca8113细胞hMLH1、MGMT基因蛋白表达的情况;检测体外应用GAA对人舌鳞癌Tca8113细胞hMLH1、MGMT基因mRNA水平的影响;检测体外应用GAA对入舌鳞癌Tca8113细胞DNA甲基转移酶mRNA的表达情况。探讨棉酚的抗肿,瘤作用机制。 方法：常规培养人舌鳞癌Tca8113细胞,用不同浓度的GAA处理细胞,应用Western-b lot检测hMLH1、MGMT基因的蛋白水平变化;利用免疫共沉淀法检测人舌鳞癌Tca8113细胞hMLH1、MGMT基因蛋白相互作用；应用RT-PCR法检测不同浓度的GAA处理后的人舌鳞癌Tca8113细胞hMLH1、MGMT基因及DNA甲基转移酶(DNMT1)mRNA表达的变化。 结果：Western-blot检测显示,用不同浓度的GAA分别处理人舌鳞癌Tca8113细胞24h.48h、72h, hMLH1、MGMT基因的蛋白表达比对照组明显增高(P<0.05);免疫共沉淀法检测结果显示人舌鳞癌Tca8113细胞hMLH1、MGMT基因蛋白表达有相互作用;经RT-PCR检测,用不...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
引言
一 实验材料
    1. 细胞株
    2. 实验药物
    3. 主要试剂
    4. 主要实验仪器
    5. 主要溶液配制
    6. 软件
二 实验方法
    1. 细胞培养
    2. 应用Western-blot检测GAA对人舌鳞癌Tca8113细胞hMLH1、MGMT基因蛋白水平变化
        2.1 Western-blot原理
        2.2 Western-blot测定步骤
            2.2.1 试剂配置
            2.2.2 细胞总蛋白的提取
            2.2.3 电泳
    3. 免疫共沉淀法检测人舌鳞癌Tca8113细胞hMLH1、MGMT基因蛋白相互用
        3.1 免疫共沉淀原理
        3.2 免疫共沉淀检测步骤
    4. 实时荧光定量RT-PCR(real-time fluorescence quantitative RT-PCR)法检测不同浓度的GAA处理后的人舌鳞癌Tca8113细胞hMLH1、MGMT基因及DNA甲基转移酶(DNMT1)mRNA表达的变化
        4.1 Real-time PCR的原理
        4.2 Real-time PCR相对定量分析方法
        4.3 RNA提取
        4.4 反转录反应第一链cDNA合成
        4.5 Real-time PCR
        4.5.1 设计引物序列
            4.5.2 Real-time PCR扩增的热循环条件
    5. 数据分析
三 实验结果
    1. Western-blot检测GAA对人舌鳞癌Tca8113细胞hMLH1、MGMT基因蛋白水平变化
        1.1 hMLH1蛋白表达
        1.2 MGMT蛋白表达
    2. 免疫共沉淀法检测人舌鳞癌Tca8113细胞hMLH1及MGMT基因蛋白相互作用
    3. RT-PCR法检测不同浓度的GAA处理后的人舌鳞癌Tca8113细胞hMLH1、MGMT基因及DNA甲基转移酶(DNMT1)mRNA表达检测结果
        3.1 hMLH1 mRNA表达
        3.2 MGMT mRNA表达
        3.3 DNMT1 mRNA表达
四 讨论
五 问题与展望
六 结论
参考文献
文献综述：棉酚及其衍生物抗肿瘤作用的研究进展
    参考文献
攻读学位期间发表的文章
致谢



本文编号：4027617