重离子束与X射线辐照对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株CXCR4与RhoC表达的影响

发布时间：2017-06-29 05:14

  本文关键词：重离子束与X射线辐照对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株CXCR4与RhoC表达的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：1.探讨不同辐射方式对Tca8113细胞株细胞中CXCR4及RhoC mRNA的表达量的影响。2.探讨不同辐射方式对Tca8113细胞株细胞中CXCR4及RhoC的蛋白表达量的影响。3.以CXCR4与RhoC的基因与蛋白的表达量变化为指标,探讨重离子束与X射线对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株侵袭能力的影响,从而为临床采用重离子束作为舌癌放射治疗的新方法提供新的理论依据。方法：人舌鳞癌Tca8113细胞株由武汉大学口腔医学院惠赠,于中国科学院近代物理研究所冻存保藏。细胞经传代培养后,采用不同剂量的重离子束与X-ray对细胞进行辐射,辐射后分别提取不同组别的细胞的总RNA。采用荧光实时定量PCR法观察细胞中CXCR4与RhoC mRNA表达量的变化。同时提取细胞总蛋白,采用Western-blot方法对CXCR4与RhoC的蛋白表达量进行检测。X线照射系统采用美国Faxition43885D型X线仪,照射能量为50kVp,剂量率为0.5Gy/min。重离子束辐射于中国科学院兰州分院近代物理研究所HIRFL重离子终端进行,照射能量为250MeV；LET为75KeV,剂量率约为1Gy/min、空白对照组辐射剂量为0,X线组与重离子组则分别设1Gy,2Gy,4Gy的辐射剂量组别,并于各剂量组下依据RNA和蛋白的实验设计设4小时、8小时、12小时、24小时等时间点。结果：1.与空白对照组比较,在相同辐射剂量下,X线辐照组细胞中CXCR4的表达量在8h时较低,于12h达到高峰,该峰值在1Gy、4Gy组较为显著(p0.05),在2Gy组则差异不明显(p0.05)；而重离子辐照组细胞中CXCR4的mRNA表达水平在辐照后12小时内均明显降低(p0.05)。在相同时间点时,重离子组CXCR4的表达量与X线组比较则有显著降低(p0.01)。2.不同辐射方式对RhoC的mRNA的相对表达量均有所抑制(p0.05),且在1Gy、2Gy与4Gy不同辐射剂量下,其受到抑制的表达趋势基本一致。在X射线组,目的基因的表达随剂量上升,受到抑制的作用则减弱；而重离子组目的基因的表达则随剂量的上升,受到的抑制作用不变或增强。且重离子组细胞辐射后各个时间点的RhoC mRNA的表达较空白对照组的表达量均有显著下降(p0.05)。3. Western blt实验结果显示：在辐射后第12小时,RhoC表达随剂量上升而有所上升,CXCR4的表达变化不大；在辐射后第24小时,RhoC的表达随剂量上升而下降,CXCR4也呈现出同样趋势但不明显。与real-time PCR结果基本吻合。结论：与常规X线相比,重离子束对体外培养的人舌鳞癌细胞中CXCR4的表达的抑制能力更强,而尽管RhoC的表达在X射线与重离子组都受到抑制,重离子束对RhoC的表达的抑制作用要优于X射线,提示重离子抑制舌鳞癌细胞侵袭的能力优于常规X射线。这可能为临床采用重离子束对舌癌进行放射治疗提供新思路。
【关键词】：重离子束 X射线 人舌鳞状细胞癌 CXCR4 RhoC 肿瘤细胞侵袭
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.86
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-10
• 第一章 绪论10-16
• 1.1 舌癌的治疗现状10-11
• 1.2 肿瘤的放射治疗进展11-14
• 1.2.1 传统放射医学与肿瘤的治疗11
• 1.2.2 重离子束与临床治疗研究11-14
• 1.2.2.1 重离子束的剂量分布11-12
• 1.2.2.2 重离子束与DNA双链损伤12
• 1.2.2.3 重离子束辐射的氧效应12
• 1.2.2.4 国内外重离子的临床研究现状12-14
• 1.3 RhoC与肿瘤的进展14-15
• 1.3.1 Rho亚家族的组成14
• 1.3.2 RhoC与肿瘤的侵袭14-15
• 1.4 CXCR4与肿瘤的进展15
• 1.5 本实验研究目的与内容15-16
• 第二章 材料与方法16-31
• 1 材料16-19
• 1.1 实验用细胞株来源16
• 1.2 实验主要试剂及仪器16-19
• 1.2.1 实验用主要仪器与设备16-17
• 1.2.2 实验用主要试剂17-19
• 2 实验方法19-31
• 2.1 人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株的培养及传代19
• 2.2 细胞的冻存与复苏19-20
• 2.2.1 细胞的冻存19-20
• 2.2.2 细胞的复苏20
• 2.3 细胞的辐射20-21
• 2.4 Real-time PCR方法检测CXCR4与RhoC mRNA的表达21-23
• 2.4.1 细胞的裂解21
• 2.4.2 细胞总RNA的提取21
• 2.4.3 RNA浓度的测定21-22
• 2.4.4 RNA逆转录22-23
• 2.4.5 Real-time PCR23
• 2.5 统计与分析23-24
• 2.6 Western blot方法检测RhoC与CXCR4的蛋白表达24-31
• 2.6.1 配制WB蛋白印记实验所用试剂24-26
• 2.6.2 提取细胞总蛋白26
• 2.6.3 蛋白浓度的测定26-27
• 2.6.4 制备蛋白电泳胶27-28
• 2.6.5 SDS-PAGE凝胶电泳28-29
• 2.6.6 转膜29
• 2.6.7 目的蛋白与抗体的结合29-30
• 2.6.8 蛋白显影30-31
• 第三章 实验结果31-40
• 3.1 人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株常规形态31-32
• 3.2 不同传能线密度(LET)射线对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中CXCR4 mRNA表达的影响32-35
• 3.2.1 1Gy辐射剂量下CXCR4的表达变化32-33
• 3.2.2 2Gy辐射剂量下CXCR4的表达变化33-34
• 3.2.3 4Gy辐射剂量下CXCR4的表达变化34-35
• 3.3 不同传能线密度(LET)射线对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中RhoC mRNA表达的影响35-38
• 3.3.1 1Gy辐射剂量下RhoC的表达变化35-36
• 3.3.2 2Gy辐射剂量下RhoC的表达变化36-37
• 3.3.3 4Gy辐射剂量下RhoC的表达变化37-38
• 3.4 不同传能线密度(LET)射线对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中CXCR4及RhoC蛋白表达的影响38-40
• 3.4.1 重离子辐照后CXCR4与RhoC蛋白的表达38
• 3.4.2 X射线辐照后CXCR4与RhoC蛋白的表达38-40
• 第四章 讨论40-43
• 4.1 恶性肿瘤的临床治疗现状40
• 4.2 CXCR4与人舌鳞癌Tca8113细胞的体外侵袭能力40-41
• 4.3 RhoC与人舌鳞癌Tca8113细胞的体外侵袭能力41-42
• 4.4 实验中存在的问题42
• 4.5 小结42-43
• 第五章 结论43-44
• 第六章 展望44-45
• 参考文献45-49
• 中英文对照49-50
• 研究生期间交流工作50-51
• 在学期间主要研究成果51-52
• 病例报告52-61
• 1) 病历摘要52-53
• 2) 术前准备及注意事项53
• 3) 手术过程：两瓣术+提肌重建术53-54
• 4) 术后管理54
• 5) 出院诊断54-56
• 6) 病例讨论与文献回顾56-59
• 1. 腭裂的发病情况56
• 2. 非综合征型腭裂与综合征型腭裂56-57
• 3. 腭裂的治疗与治疗时机的把握57-58
• 4. 腭帆提肌重建与腭咽闭合58
• 5. 腭裂术后的其他治疗58-59
• 参考文献59-61
• 致谢61-62

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 徐琴;赵正言;;Wolf-Hirschhorn综合征1例[J];中国实用儿科杂志;2012年09期

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本文编号：496690