Nrf2在根尖周炎及牙髓血运重建中作用的初步研究

发布时间：2017-07-07 02:00

  本文关键词：Nrf2在根尖周炎及牙髓血运重建中作用的初步研究

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【摘要】：研究背景根尖周炎是一种多由微生物感染引起的发生在牙根尖周组织的炎症性疾病。临床上,对于发生根尖周炎的牙齿,需进行根管治疗,而年轻恒牙治疗方法还包括氢氧化钙根尖诱导成形术和现在临床上较常用的MTA根尖屏障术。但根尖诱导成形术时间和效果不确定,根尖屏障术虽然可以提高患者的依从性,提高了治愈的概率,但很难使牙根得到完全发育。短而薄弱的牙根会增加后续折裂的可能性。年轻恒牙根尖周炎的治疗,预期达到的结果应包括治愈根尖周炎症、促进牙根的继续发育及牙髓组织的功能性(组织学和感觉)修复的完成。然而目前治疗方案很难达到这一目标,仅能在治愈根尖周炎症这一方面有所保障。临床研究和一系列病例报道均表明,牙髓坏死伴根尖周炎的年轻恒牙经过严格根管消毒、刺激根尖周血液进入根管和严密冠部充填,可能够使得牙根继续发育,X线表现为牙根长度增加、根管壁增厚、根尖孔逐渐闭合以及根尖病变消失,这一治疗方法称为“牙髓血运重建”(pulp revascularization)。根尖周病的发生、发展以及牙髓血运重建的过程是多重因素交互作用,机制非常复杂的过程,对其机制存在许多假设尚未形成成熟的理论,有待进一步研究。研究根尖周炎的发病机制,尤其是各种细胞因子及转录因子在根尖周炎中的作用,一直以来都是国内外学者研究的热点。转录因子E2相关因子2(nuclear factor-E2-related factor 2, Nrf2)是一种核转录因子,以Keap1-Nrf2-ARE信号通路介导Ⅱ相解毒酶和抗氧化基因的转录,被认为是迄今为止细胞抗氧化机制中发现的最重要的通路。许多疾病的发生都与氧化应激相关,Keap1-Nrf2-ARE通路的抗氧化作用广泛,可以保护多种细胞,在许多疾病中起到重要作用,其中包括恶性肿瘤、帕金森病、阿尔茨海默病、糖尿病等。近年来发现其在炎症的抑制中也能起到重要作用。研究表明Keapl-Nrf2-ARE信号通路参与削弱炎症相关病理过程。此外,Nrf2还有促血管形成的功能。研究表明,Nrf2与血管的形成修复、血管内皮细胞的保护、增殖、分化、迁移以及血管形成能力相关。Nrf2与口腔疾病相关的研究较少。近年来学者研究表明Keapl-Nrf2-ARE通路的激活可能抑制牙龈卟啉单胞菌LPS刺激的巨噬细胞炎症反应及结扎诱导的大鼠牙周炎的发展等。根尖周炎的发生发展是炎症相关病理过程,牙髓血运重建过程,是一个在炎症控制的条件下根管内新生组织长入的过程,而新生组织的生存离不开血运的重建,故推测Nrf2在根尖周炎的发展以及牙髓血运重建过程也可能起到一定作用。综上所述,Nrf2是一种在细胞保护、炎症控制及血管形成中均有可能起到重要作用的转录因子,但由于伦理道德上存在局限性,在人体内难以检测其在根尖周炎及牙髓血运重建过程中的动态表达过程。本实验选择小鼠作为实验对象,测定Nrf2在炎症及组织愈合过程中分布及表达量随时间变化的规律,为探索根尖周炎愈合及牙髓血运重建的机制提供一定的理论依据。研究目的本实验拟通过建立小鼠根尖周炎及牙髓血运重建模型,研究Nrf2在根尖周炎发展及牙髓血运重建组织新生过程中的影响,为研究根尖周炎发生发展及牙髓血运重建机制提供一定理论依据。材料与方法第一部分 小鼠下颌第一磨牙根尖周炎模型的建立20只3周龄C57BL/6小鼠随机选取10只作为实验组,另外10只作为对照组。实验组小鼠下颌第一磨牙从冠部开髓,髓腔开放于口腔环境3周。于术后3周处死实验动物,分离下颌骨,进一步进行组织学、影像学及荧光定量PCR(qRT-PCR)检测。5只实验动物脱颈处死,分离下颌骨,固定24 h,使用Micro-CT成像系统对标本逐个进行断层扫描成像,用于后续观察分析。扫描过后标本制作石蜡切片,进行HE染色。将实验组另外5只小鼠脱颈处死,提取根尖周及根管内组织总RNA, qRT-PCR检测炎症因子IL-1、IL、TNF-α mRNA表达情况,对结果进行统计学分析。第二部分小鼠下颌第一磨牙牙髓血运重建模型的建立30只3周龄C57BL/6小鼠随机选取20只作为实验组(10只使用流动树脂行冠部充填,10使用玻璃离子水门汀行冠部充填),另外10只作为对照组。实验组小鼠下颌第一磨牙从冠部开髓,使用6#、8#K锉疏通根管,去除牙髓,并将K锉超出根尖孔,刺激根尖周组织出血至根管口水平,待血凝块形成后,使用MTA覆盖整个血凝块面。其中10只小鼠使用玻璃离子水门汀(GIC)进行冠部充填,另外10只小鼠使用流动树脂进行冠部充填,记录手术时间。术后3周检查牙髓血运重建组充填物脱落情况,对两组手术时间及充填物脱落率进行统计学分析。处死实验动物,分离下颌骨,同实验一方法进一步进行组织学、影像学分析及qRT-PCR检测VEGF mRNA表达情况。第三部分Nrf2在根尖周炎及牙髓血运重建过程中表达的研究10只3周龄C57BL/6小鼠进行脱颈处死,分离下颌骨,置于4%中性多聚甲醛中固定24 h,使用防脱片制作石蜡切片进行免疫组化染色,检测Nrf2表达情况。20只小鼠,左侧下颌第一磨牙行牙髓血运重建术,右侧下颌第一磨牙将牙髓腔直接开放于口腔环境3周,造成实验性根尖周炎。于术后1、4周处死实验动物,分离下颌骨,进一步进行HE染色、影像学扫描。提取组织总RNA,根尖周炎组qRT-PCR检测Nrf2、ILβ、IL-6、TNF-α mRNA表达情况,牙髓血运重建组检测Nrf2、VEGF mRNA表达情况,未经处理的小鼠作为对照组,检测以上所有因子。根尖周炎组及牙髓血运重建组各时间点分别选取与HE染色结果连续的切片进行免疫组化染色,观察Nrf2表达变化。结果1.建立小鼠下颌第一磨牙根尖周炎模型实验期间动物一般状况良好,未观察到明显牙体折裂或松动。Micro-CT显示,术后3周根尖周炎组下颌第一磨牙可观察到根尖周骨质破坏。组织学结果表明,根管内充满坏死物质,根尖周大量巨噬细胞、中性粒细胞、淋巴细胞等慢性炎症细胞浸润,IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达显著高于对照组(P0.05)。2.建立小鼠下颌第一磨牙牙髓血运重建模型术后3周,牙髓血运重建组部分牙冠部充填物脱落。与流动树脂组相比,玻璃离子水门汀组手术耗时较少,且充填物脱落率低,差异均具有统计学意义(P0.05)。Micro-CT显示,牙链血运重建组下颌第一磨牙牙冠可见高密度充填物影像,封闭根管口,根管腔缩窄,管壁增厚,根尖部膨大,有新生硬组织形成,根尖孔缩小。组织学分析表明,管腔有血管化的新生组织长入,根尖部有骨样及软骨样组织沉积,VEGF mRNA表达显著高于对照组(P0.05)。3.Nrf2在根尖周炎及牙髓血运重建过程中表达的变化正常情况下,Nrf2在牙髓及根尖周组织中表达较少,表达部位主要在胞浆。与对照组相比,实验组各时间点Nrf2阳性细胞都有所增加,胞浆与胞核都存在Nrf2表达,且胞核Nrf2表达大大增加。根尖周炎组中术后1周Nrf2阳性细胞多于术后4周,根管内及根尖周炎症区域可见Nrf2呈阳性表达,主要位于淋巴细胞、中性粒细胞等炎症细胞中,细胞呈圆形或椭圆形,胞浆或胞核呈棕黄色深染,根管内成纤维细胞也可见Nrf2阳性表达。牙髓血运重建组中术后4周Nrf2阳性细胞多于术后1周,可见根管内及根尖周组织Nrf2呈阳性表达,主要为形状不规则的成纤维细胞样细胞。结论1.本实验成功建立小鼠下颌第一磨牙根尖周炎模型,并采用影像学、组织学和分子生物学的方法对根尖周炎模型进行评价,实验结果表明,与对照组相比,根尖周炎组根尖周病损形成,该模型的成功建立可便于进一步研究根尖周炎炎症发展机制。2.本实验成功建立并评价小鼠下颌第一磨牙去髓后血运重建模型,且认为玻璃离子水门汀更适用于术后冠部充填。实验结果表明,牙髓血运重建组可观察到新生组织形成,根尖继续发育,该模型的成功建立可便于进一步研究牙髓血运重建机制。3.小鼠实验性根尖周炎及牙髓血运重建过程中,Nrf2的表达显著增加,且表达量与时间相关,说明Nrf2在根尖周炎炎症控制及牙髓血运重建组织新生修复过程中具有一定作用,但机体作用机制不明确,需进一步深入研究。
【关键词】：小鼠 牙髓血运重建 根尖周炎 Micro-CT 炎症因子
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R781.341
【目录】：

• 摘要3-8
• ABSTRACT8-15
• 前言15-19
• 第一章 小鼠下颌第一磨牙根尖周炎模型的建立19-30
• 1 材料与方法19-26
• 2 结果26-28
• 3 讨论28-30
• 第二章 小鼠下颌第一磨牙牙髓血运重建模型的建立30-40
• 1 材料与方法30-34
• 2 结果34-37
• 3 讨论37-40
• 第三章 Nrf2在根尖周炎及牙髓血运重建过程中表达的研究40-57
• 1 材料与方法40-49
• 2 结果49-54
• 3 讨论54-57
• 全文总结57-58
• 参考文献58-65
• 成果65-67
• 缩略词表67-68
• 致谢68-70

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4 刘树珂;夏勇;;冠状动脉支架置入术后再次血运重建的临床研究[J];中国现代医药杂志;2014年04期

5 Held C.;Tornvall P.;Stenestrand U.;刘少伟;;于因急性冠状动脉综合征入院14d内行血运重建对曾行冠状动脉搭桥的患者1年死亡率的影响[J];世界核心医学期刊文摘(心脏病学分册);2007年07期

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7 翟，

本文编号：528452