microRNA-188作用于靶基因SIX1负调控ERK信号通路抑制口腔鳞癌细胞的增殖侵袭

发布时间：2017-07-27 11:14

  本文关键词：microRNA-188作用于靶基因SIX1负调控ERK信号通路抑制口腔鳞癌细胞的增殖侵袭

  更多相关文章： SIX1 口腔鳞癌 增殖 侵袭 细胞外信号调节激酶 上皮间质转化 miR-188

【摘要】：[目的]摸索SIX1、miR-188在口腔鳞癌组织细胞中的生物学效应及其所能具有的能力。分析SIX1在口腔鳞癌细胞中发挥其作用所依赖的信号通路以及miR-188在口腔鳞癌细胞中的潜在分子机制。[方法]原发性肿瘤样本、口腔鳞癌新鲜组织以及相对应的临近的健康组织进行免疫组织化学；细胞培养、转染；实时荧光定量PCR；Western blot;集落形成实验；MTT实验；流式细胞术分析细胞周期；基质胶侵袭实验；荧光素报告实验。[结果]1.SIX1在口腔鳞癌中的表达：正常的口腔上皮细胞里是没有SIX1表达阳性染色的。在80例的口腔鳞癌病理样本里有32例的SIX1呈现细胞核和细胞浆阳性反应。2.SIX1对于口腔鳞癌的临床意义：SIX1的过度表达同较高的TNM分级,瘤体不同时期以及是否有淋巴结的转移显著相关。3.SIX1促进口腔鳞癌细胞的增殖和侵袭：Detroit 562细胞系内源增殖数量偏大,KB细胞系内源增殖数量偏小。SIX1转染后能够显著上调SIX1信使RNA以及相应蛋白质的表达量,siRNA基因干扰则能起到相反的作用。MTT发现SIX1转染能够增强KB细胞系的增殖能力,经过siRNA处理的Detroit 562细胞系则阻碍细胞增殖。transwell实验证明了,SIX1干扰后细胞的增殖浸润弱化而SIX1转染后细胞的增殖浸润显著增强。4.SIX1调控cyclin D1以及MMP-2:SIX1转染能够显著提高cyclin D1以及MMP-2蛋白合成,SIX1干扰则抑制了这些蛋白的合成。5.SIX1通过ERK信号通路调控MMP-2：SIX1过表达能够明显提高ERK的磷酸化能力,相反对于JNK和p38的磷酸化能力不产生改变。6.SIX1调控上皮间质转化：SIX1过度表达能够降低KB细胞群内E-cadherin的含量水平,相反SIX1干扰会略提高E-cadherin的含量水平。同时SIX1对Snail和Twist蛋白质的表达还具有正向调控作用。7.miR-188在口腔鳞癌细胞中表达下调-13腔鳞癌病理组织内miR-188的含量显著下调。口腔鳞癌病理组织细胞中miR-188含量较相应的健康部分为少,比值为0.457。8.miR-188在体外细胞系中的表达：Detroit 562细胞群内miR-188的含量并不高,而FaDu细胞群内miR-188的含量略高。miR-188 mimic转染能够显著上调Detroit 562细胞系中miR-188的表达量；但miR-188抑制剂能够显著下调FaDu细胞系中miR-188的含量。9.miR-188在体外能够调控细胞的增殖和侵袭miR-188 mimic转染后Detroit 562细胞系集落形成数目显著降低,miR-188抑制剂转染后FaDu细胞系集落形成数目显著增加。基质胶侵袭实验中Detroit 562细胞系中外源性miR-188含量增加,穿过基底胶的细胞总量明显降低。miR-188抑制剂转染FaDu细胞系,穿过基质胶到达上层的细胞数目明显增加。10.miR-188在体外能够调控细胞周期进程：经过miR-188 mimic争染后能够抑制细胞由G1向S转变,经过miR-188抑制剂处理的细胞系能够促进细胞周期进程的转变。11.miR-188上调cyclin D1, cyclin E和MMP9蛋白的表达量：经过miR-188 mimic转染后能够显著下调cyclin D1, cyclin E和MMP9的表达量,miR-188抑制剂转染能够明显上调以上蛋白质的表达量。12.miR-188负调控致癌基因SIX1:Detroit 562细胞系转染后,miR-188的过量表达能够显著减少SIX1信使RNA的表达量。13.S1X1为miR-188作用的直接靶基因：载有野生型SIX1基因的Detroit 562细胞系,经过miR-188mimic的转染之后,荧光含量测定呈现降低的趋势,而载有突变型SIX1基因的Detroit562细胞系中荧光强度则没有明显变化。表明SIX1基因的3'端非编码区域是miR-188的直接结合位点,并通过这样的结合下调SIX1信使RNA的表达量。miR-188与SIX1信使RNA表达量呈现负相关。SIX1基因千扰后发现：SIX1能够消除siRNASIX1对于cyclin D1以及MMP9蛋白质表达下调的影响。在SIX1基因沉默的FaDu细胞系中,使用miR-188抑制剂也未能上调cyclin D1以及MMP9蛋白质的表达量。[结论]1.SIX1于人类口腔鳞癌病理组织中呈过量表达。2.SIX1的过表达对于肿瘤细胞的增殖、浸润有促进作用。3.SIX1促进肿瘤细胞增殖和浸润的作用机制为ERK-MMP-2信号传导以及上皮间质的转化(EMT).4. miR-188是口腔鳞癌细胞中一种下调的miRNA,并且它是一种恶性肿瘤细胞抑制剂。5.在口腔鳞癌病理组织中miR-188通过SIX1基因达到抑制细胞的扩增和浸润的目的。
【关键词】：SIX1 口腔鳞癌 增殖 侵袭 细胞外信号调节激酶 上皮间质转化 miR-188
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.8
【目录】：

• 英文缩略语5-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-13
• 技术路线13-14
• 1. 课题研究背景14-16
• 2. 实验一 SIX1在口腔鳞癌中过表达并促进细胞的增殖及侵袭的研究16-33
• 2.1 材料与方法16-25
• 2.2 结果25-31
• 2.3 讨论31-32
• 2.4 小结32-33
• 3. 实验二 SIX1通过ERK信号通路以及EMT促进细胞侵袭33-42
• 3.1 材料与方法33-38
• 3.2 结果38-40
• 3.3 讨论40-41
• 3.4 小结41-42
• 4. 实验三 microRNA-188在口腔鳞癌细胞中下调并通过靶基因SIX1抑制细胞的增殖与侵袭42-60
• 4.1 材料与方法42-51
• 4.2 结果51-59
• 4.3 讨论59-60
• 4.4 小结60
• 5. 全文总结60-62
• 参考文献62-67
• 文献综述67-77
• 参考文献73-77
• 个人简介77
• 攻读学位期间发表文章情况77-78
• 致谢78

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 万学勤,李宏鸣,龙敏,张炳团,刘爱平;鸡新城疫病毒对人类口腔鳞癌细胞的杀伤作用[J];现代肿瘤医学;2004年04期

2 陈军;赵建江;王治平;盘杰;黄宇华;;量子点对口腔鳞癌细胞活性的影响[J];广东医学;2010年20期

3 王晓里;陈瑞梅;王植三;陈文磊;;口腔鳞癌细胞增殖特性的流式细胞光度分析[J];现代口腔医学杂志;1989年01期

4 金晓明,李金荣,李雅馨,李祖兵;外源性转化生长因子β1对口腔鳞癌细胞中相关基因表达的影响[J];实用口腔医学杂志;2003年06期

5 孙毅;尚政军;;内皮前体细胞与口腔鳞癌细胞自发性融合的实验研究[J];中国美容医学;2013年15期

6 申俊;柏景坪;王维倩;顾亚军;;组蛋白去乙酰化酶抑制剂与顺铂联用激活线粒体信号通路诱导口腔鳞癌细胞的凋亡[J];医学研究杂志;2011年02期

7 宿颖;葛丽华;苗聪聪;张敏;张辛燕;;三氧化二砷对口腔鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用[J];北京口腔医学;2013年01期

8 黄晓君;叶茂昌;李容新;王来平;;姜黄素对口腔鳞癌细胞生长增殖及相关蛋白影响的实验研究[J];口腔医学研究;2007年02期

9 ;Possible Mechanism Responsible for Changes of β-dystroglycanin Oral Squamous Cell Carcinoma[J];口腔医学研究;2006年01期

10 李德超;李善昌;关键;;口腔鳞癌细胞缺氧诱导因子表达水平与其对顺铂敏感性的研究[J];临床和实验医学杂志;2007年11期

中国重要会议论文全文数据库 前8条

1 庞宝兴;金晓明;尚伟;;姜黄素对口腔鳞癌细胞的增殖抑制作用及相关机制研究[A];第八次全国口腔颌面—头颈肿瘤会议论文汇编[C];2009年

2 张志光;张谦;何一青;陈诗书;;细胞因子基因修饰人口腔鳞癌细胞的体外生物学行为[A];第一届全国口腔颌面部肿瘤学术会议论文汇编[C];2001年

3 何地;陈万涛;;藤黄酸对口腔鳞癌细胞体外作用的研究[A];第五次全国口腔颌面—头颈肿瘤学术研讨会论文汇编[C];2006年

4 张壮;潘剑;李龙江;;高淋巴道转移的口腔鳞癌细胞对淋巴管生成的影响[A];第五次全国口腔颌面—头颈肿瘤学术研讨会论文汇编[C];2006年

5 罗清琼;胡水清;陈福祥;;TLR3在口腔鳞癌细胞中作用的初步研究[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年

6 阮敏;季彤;杨雯君;张陈平;;紫草素诱导口腔鳞癌细胞Tca-8113凋亡及相关机制的的研究[A];海峡两岸2008口腔癌诊治与修复重建新进展研讨会论文集[C];2008年

7 李春阳;程斌;洪筠;杨灵澜;叶萍;冯崇锦;;cdc25A-Fas嵌合基因真核表达载体的构建与鉴定[A];中华口腔医学会第六届全国口腔黏膜病学术会议论文集[C];2004年

8 张敏;张辛燕;;三氧化二砷和放疗结合对口腔癌治疗作用的体外研究[A];第七届全国口腔黏膜病暨第五届口腔中西医结合大会论文汇编[C];2008年

中国博士学位论文全文数据库 前5条

1 王莉莉;microRNA-188作用于靶基因SIX1负调控ERK信号通路抑制口腔鳞癌细胞的增殖侵袭[D];中国人民解放军医学院;2016年

2 柴娟;P12~(CDK2-AP1)与CD82相互作用对口腔鳞癌细胞OSCC-15及裸鼠移植瘤生长作用的研究[D];第四军医大学;2016年

3 申俊;组蛋白去乙酰化酶抑制剂与顺铂联用对口腔鳞癌细胞作用的体外研究[D];四川大学;2007年

4 高扬;RNA干涉抑制STAT3基因诱导口腔鳞癌细胞发生凋亡的体内外实验研究[D];吉林大学;2011年

5 张文超;构建人CXCL12-KDEL融合基因抑制CXCL12-CXCR4生物轴对口腔鳞癌细胞趋化转移作用的实验研究[D];天津医科大学;2008年

中国硕士学位论文全文数据库 前6条

1 庞宝兴;姜黄素对人口腔鳞癌细胞的增殖抑制作用及机制研究[D];青岛大学;2010年

2 黄晓君;姜黄素对口腔鳞癌细胞生长增殖及相关蛋白影响的实验研究[D];安徽医科大学;2007年

3 李栋;Fat-1对人口腔鳞癌细胞影响的研究[D];吉林大学;2011年

4 陈军;利用量子点探针对口腔鳞癌细胞中多种特定蛋白进行实时空间动态示踪的研究[D];南方医科大学;2010年

5 石芳琼;MICA基因修饰的口腔鳞癌细胞疫苗诱导抗肿瘤免疫应答的实验研究[D];中南大学;2011年

6 盘杰;量子点荧光技术标记口腔鳞癌细胞中bcl-2、bax蛋白的应用研究[D];南方医科大学;2009年

，

本文编号：581130