齐墩果酸联合二甲亚砜对粪肠球菌抑菌作用研究

发布时间：2017-08-03 06:09

  本文关键词：齐墩果酸联合二甲亚砜对粪肠球菌抑菌作用研究

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【摘要】：目的:粪肠球菌(Enterococcus faeealis,E.faecalis)在再感染根管、难治性根尖周炎根管中检出率高,是公认的致病菌。目前常用的根管消毒药物对于抑制根管内粪肠球菌生长的有效性、安全性尚不能达到较为理想的效果。齐墩果酸(Oleanolic acid,OA)是一种纯天然药物,毒性极低,具有良好的抑菌作用,能抑制粪肠球菌生长,国内常用于急慢性肝炎的治疗。二甲亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)是一种有机溶剂,能够增强药物的渗透性,对生物膜的渗透作用好,且其本身也具有抗菌作用,是研究齐墩果酸常用的赋形剂。但是,以往在研究齐墩果酸抑菌作用时并未考虑二甲亚砜的抗菌作用对实验结果可能存在的影响。我们推测齐墩果酸可能是一种理想的根管消毒药物,齐墩果酸联合二甲亚砜应用于根管封药有利于提高急慢性肝炎患者根管消毒的疗效。故本研究将齐墩果酸溶于二甲亚砜,采用倍比稀释法、微量棋盘稀释法、菌落计数法、荧光染色激光共聚焦显微镜观察等方法,研究两种药物联合抑制浮游态粪肠球菌时的联合药敏效果,以及抑制离体牙感染根管内和单一生物膜中的粪肠球菌生长的有效性,评价两者药物联合使用时的相互影响作用,探讨齐墩果酸联合二甲亚砜用于粪肠球菌感染根管治疗的有效性,为进一步将齐墩果酸应用于根管消毒提供理论依据和数据支持。方法:1.采用液体倍比稀释法和琼脂稀释法,分别测定二甲亚砜和齐墩果酸各自对粪肠球菌的最小抑菌浓度值(minimalinhibitoryconcentration,mic);采用96孔板微量棋盘稀释法,通过计算抑菌浓度分数指数(fractionalinhibitoryconcentrationindex,fici),评价两种药物联用时的抑菌作用。2.收集新鲜拔除的单根管恒牙,在根管内建立粪肠球菌感染模型。随机将样本分为三组:a组为1mg/ml齐墩果酸+50%二甲亚砜组(实验组),b组为2%醋酸氯己定组(阳性对照组),c组为去离子水组(空白对照组)。各组根管内封药,分别于处理前及处理1h、24h、7d时取样,进行细菌计数培养,比较各组细菌量的变化,并进行统计学分析。3.在盖玻片上建立24h粪肠球菌单一生物膜模型,随机分为三组:1mg/ml齐墩果酸+50%二甲亚砜组(实验组),2%醋酸氯己定组(阳性对照组),去离子水组(空白对照组)。各组药物分别作用30min后,吖啶橙/溴化乙锭(ao/eb)荧光染色,置于激光共聚焦显微镜(confocallaserscanningmicroscope,clsm)下观察粪肠球菌染色情况及死、活菌数量变化。结果:1.二甲亚砜对粪肠球菌的mic值为20%,齐墩果酸对粪肠球菌的mic值为100μg/ml。联合用药时,二甲亚砜联合齐墩果酸的最小抑菌浓度:二甲亚砜(联合)浓度为10%,齐墩果酸(联合)浓度为1.25μg/ml。抑菌浓度分数指数(fici)为0.51250.5,表明齐墩果酸与二甲亚砜联合对粪肠球菌的联合药敏作用表现为相加作用。2.对根管内粪肠球菌菌落数进行统计学分析发现,三组处理后比处理前细菌数量均有减少,A组、B组减少量均具有统计学意义(P0.05),C组减少量1h、24h时不具有统计学意义(P0.05),7d时差异有统计学意义(P0.05)。A组所需作用时间较B组稍长,1h时两者菌落数差异有统计学意义(P0.05),24h、7d时均能完全抑制根管内粪肠球菌生长,差异无统计学意义(P0.05)。A组、B组处理1h、24h、7d时,与C组相比差异均具有统计学意义(P0.05)。3.通过CLSM观察三组粪肠球菌生物膜,结果显示实验组、阳性对照组生物膜中以死菌为主,仅见散在零星分布活菌。空白对照组生物膜中以活菌为主,仅存在极少量死菌。结论:齐墩果酸联合二甲亚砜对游离态、根管内及单一生物膜中粪肠球菌的生长及细菌活性均具有明显的抑制作用,可能是一种较为理想的根管消毒药物。若应用于临床,可能提高根管再治疗、难治性根尖周炎的治愈率。
【关键词】：齐墩果酸 二甲亚砜 粪肠球菌 根管 激光共聚焦显微镜
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R780.2
【目录】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-15
• 实验一 齐墩果酸联合二甲亚砜对粪肠球菌抑制作用的药敏研究15-23
• 1 材料与方法15-19
• 2 结果19-23
• 实验二 齐墩果酸联合二甲亚砜对根管内粪肠球菌抑制作用的体外研究23-30
• 1 材料与方法23-26
• 2 结果26-30
• 实验三 齐墩果酸联合二甲亚砜对单一生物膜中粪肠球菌活性影响的体外研究30-37
• 1 材料与方法30-33
• 2 结果33-37
• 讨论37-47
• 结论47-48
• 参考文献48-58
• 英汉缩略词对照表58-59
• 致谢59-60
• 齐墩果酸的药理作用机制及其在口腔疾病治疗中的展望（综述）60-72
• 参考文献67-72

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本文编号：612945