大鼠牙囊细胞膜片联合骨髓间充质干细胞三维共培养促进牙周组织再生的初步研究
本文关键词：大鼠牙囊细胞膜片联合骨髓间充质干细胞三维共培养促进牙周组织再生的初步研究
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【摘要】：目的：探讨联合应用牙囊细胞(rDFCs)膜片与骨髓间充质干细胞(rBMSCs)三维共培养促进牙周组织缺损重建的可行性。方法：1.rDFCs、rBMSCs的体外分离、培养和鉴定。2.rDFC s膜片的构建和检测。将第3代rDFC接种到温度敏感培养皿中,用含有80μg/ml抗坏血酸成膜诱导液连续诱导2周,检测细胞膜片生物学活性。行HE染色鉴定。3.rBMSCs复合nHA-PLGA支架材料三维聚合体的构建与检测。取生长良好的第3代rBMSCs按5*105密度接种于nHA-PLGA支架材料,静置培养6天。扫面电镜观察细胞在支架上的黏附生长情况。4.rDFCs膜片包裹“rBMSCs-nHA-PLGA支架材料三维聚合体”进行体内移植。通过rDFC细胞膜片包裹已接种有rBMSCs的nHA-PLGA支架材料组成的细胞-支架三维聚合体,并将其贴合固定于预制牙本质片后植入裸鼠皮下,研究组织再生情况。实验分组：1.牙本质片+nHA-PLGA;2.牙本质片+nHA-PLGA-rBMSCs聚合体；3.牙本质片+nHA-PLGA-rBMSCs聚合体+rDFC细胞膜片。于第8周处死实验对象,收集标本,分别进行HE和MASSON染色。结果：1.成功分离培养大鼠DFCs、BMSCs,并鉴定。2.rDFCs细胞膜片HE染色结果显示rDFC细胞膜片具有一定的厚度,细胞层数为2-5层,细胞基质分泌丰富。3.rBMSCs接种nHA-PLGA支架材料电镜扫描结果显示rBMSCs能黏附于HA-PLGA支架材料生长,且生长状态良好。4. rDFCs细胞膜片复合nHA-PLGA支架材料与骨髓间充质干细胞三维聚合体裸鼠皮下移植收集标本,HE及Masson染色结果显示：组3中牙本质片与支架材料间有一细胞条带,有似牙周膜的纤维样组织生成,支架材料侧有类骨组织及新鲜血管形成。组2中牙本质片与支架材料间亦有少量纤维样组织生成,支架材料有吸收,无骨样组织形成。组1中则未见纤维样组织生成。结论：rDFCs膜片与接种rBMSCs的nHA-PLGA三维支架复合,形成双细胞三维共聚体,植入裸鼠皮下,实验结果显示新生组织有类似牙周膜样的纤维组织、骨样组织及新的血管形成,这提示rDFCs与rBMSCs作为种子细胞联合应用,进行三维共培养,可有效增强牙周组织再生能力,为牙周组织再生提供了新的思路。
【关键词】：牙囊细胞膜片 骨髓间充质干细胞 旁分泌效应 nHA-PLGA支架材料 牙周组织工程
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R783
【目录】：
- 英汉缩略语名词对照6-7
- 中文摘要7-9
- 英文摘要9-12
- 前言12-14
- 第一部分 大鼠牙囊细胞及骨髓间充质干细胞的分离、培养及鉴定14-29
- 第一节 大鼠牙囊细胞的分离、体外培养及鉴定14-22
- 1 材料和方法14-18
- 2 结果18-21
- 3 讨论21-22
- 4 小结22
- 第二节 大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养及鉴定22-29
- 1 材料和方法22-24
- 2 结果24-27
- 3 讨论27-28
- 4 小结28-29
- 第二部分 牙囊细胞细胞膜片、骨髓间充质干细胞复合nHA-PLGA支架材料三维聚合体的制备与检测29-36
- 第一节 大鼠牙囊细胞膜片的构建与检测29-33
- 1 材料和方法29-30
- 2 结果30-32
- 3 讨论32-33
- 4 小结33
- 第二节 大鼠骨髓间充质干细胞复合nHA-PLGA支架材料三维聚合体的构建与检测33-36
- 1 材料和方法33-34
- 2 结果34-35
- 3 讨论35
- 4 小结35-36
- 第三部分 大鼠牙囊细胞膜片复合骨髓间充质干细胞与nHA-PLGA三维聚合体促进牙周组织再生的体内实验36-46
- 1 材料与方法36-40
- 2 结果40-43
- 3 讨论43-44
- 4 小结44-46
- 全文总结46-48
- 参考文献48-52
- 文献回顾52-63
- 参考文献58-63
- 致谢63-64
- 攻读硕士学位期间发表的论文64
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