载抗菌肽（KSL-W）微球的缓释研究

发布时间：2017-08-05 02:11

  本文关键词：载抗菌肽（KSL-W）微球的缓释研究

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【摘要】：目的:本实验选用已被前期实验证实对引起种植体周围炎的病原菌如具核梭杆菌和牙龈卟啉单胞菌等有明显的抑制作用的人工合成抗菌肽(KSL-W),通过静电纺丝技术和乳化交联的方法将抗菌肽其载入PLGA与壳聚糖的复式微球中,检测不同时期复式微球缓释的抗菌肽浓度对具核梭杆菌的抑菌效果,为以后种植体周围炎的相关研究提供理论依据。方法:1.载抗菌肽(KSL-W)的PLGA微球的制备依据(KSL-W)氨基酸的序列,人工合成此抗菌肽。本实验采用静电纺丝的方法将抗菌肽(KSL-W)投放在PLGA微球中。2.双重载抗菌肽(KSL-W)PLGA/壳聚糖复式微球的制备在第一步制备在抗菌肽(KSL-W)PLGA微球的基础上,为了避免PLGA降解产酸会的破坏抗菌肽的稳定性的问题,通化乳化交联的方法将壳聚糖包裹在PLGA微球的外壳中即PLGA/壳聚糖复式微球,从而达到中和了降解产物的酸性微环境。3.微球的形貌及抗菌肽(KSL-W)在微球中的分布情况扫描电子显微镜来观察微球的表面形态,激光共聚焦显微镜观察抗菌肽(KSL-W)在微球中的分布情况。4.微球的包埋率将乙腈溶液溶解定量微球PLGA和2%的醋酸溶液溶解定量PLGA/壳聚糖复式微球,然后紫外分光光度计测量抗菌肽(KSL-W)微球的载药情况。5.载抗菌肽(KSL-W)的PLGA/壳聚糖复式微球在80天里缓释抗菌肽的浓度曲线及累计曲线紫外分光光度计测量在固定时间点上缓释出来上清液抗菌肽的浓度。6.载抗菌肽(KSL-W)PLGA/壳聚聚糖复式微球缓释中的抗菌肽的分子量和二级结构分析飞行时间质谱仪及远紫外二色谱仪检测第30天缓释液中抗菌肽的相对分子质量和二级结构。7.复式微球的抑菌性能牛津杯法即琼脂扩散法来评价复式微球在缓释的不同时期对具核梭杆菌的抑菌活力。8.微球的细胞活性评价通过MC3T3-E1细胞增殖情况来评价载抗菌肽(KSL-W)复式微球对细胞的影响。结果:电镜图片显示PLGA微球具有光滑而又紧密的球形结构,PLGA/壳聚糖复式微球是具有皱褶的表面的球形结构。激光共聚焦图片显示在PLGA微球和PLGA/壳聚糖复式微球中有较多抗菌肽(KSL-W)的分布,在PLGA/壳聚糖复式微球中可以看到所被壳聚糖包埋的PLGA微球。扫描电镜的图片也显示了PLGA微球的平均粒径约10μm左右,而激光粒度分析仪的结果显示PLGA/壳聚糖复式微球的粒径主要分布在10-100μm之间,平均粒径主要集中于60-80μm。PLGA/壳聚糖复式微球中抗菌肽的包埋率在60-70%之间,而单纯在抗菌肽(KSL-W)PLGA微球的包埋率在93%左右。体外缓释的结果显示在缓释的前10天里出现了微球的药物突释,并且可以看出在缓释的80天,PLGA/壳聚糖复式微球依然缓慢的释放抗菌肽(KSL-W)。通过飞行时间质谱仪测出微球中抗菌肽相对分子质量与原始抗菌肽一致,远紫外二色谱仪测出缓释出来的抗菌肽(KSL-W)与原始抗菌肽(KSL-W)二级结构的谱线相近。菌实验中可看出在缓释的第10天可明显观察到抑菌环,而对照组并没有发现抑菌环。观察第30天抑菌环大小与第10天的并没有很明显的差别。而在第50天,抑菌环明显在减小,第80天时仅有一点点抑菌环存在。细胞活性评价显示在微球在不同缓释时期并没用显著的差异。结论:抗菌肽(KSL-W)可以投放在PLGA微球和PLGA/壳聚糖复式微球中;在整个复式微球制备、储存和缓释过程中抗菌肽活性未受影响;30天内缓释复式微球具有明显抑菌效果。
【关键词】：KSL-W 抗菌肽 微球 种植体周围炎
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R783.6
【目录】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 材料和方法13-18
• 一、实验材料与器械13-14
• （一）主要实验材料13-14
• （二）主要实验器械14
• 二、实验方法14-18
• 1.载抗菌肽（KSL-W）PLGA 微球的制备14-15
• 2.制备载抗菌肽（KSL-W）PLGA/壳聚糖复式微球15
• 3.形貌分析15-16
• 4.微球的粒径分析16
• 5.微球的包埋率16
• 6.体外释放动力学16
• 7.抗菌肽稳定性的分析16-17
• 8.抑菌实验17
• 9.细胞培养实验17-18
• 结果18-24
• 1.微球表面形态分析18
• 2.微球中抗菌肽（KSL-W）的分布情况18-19
• 3.微球的粒径分布情况19
• 4.微球的平均粒径及包埋率19-20
• 5.体外释放实验20
• 6.微球中缓释抗菌肽的累积释放曲线20-21
• 7. 微球缓释出的抗菌肽（KSL-W）的相对分子质量分析21
• 8.微球缓释出抗菌肽（KSL－W）二级结构分析21-22
• 9.抑菌性能22
• 10.细胞活性评价22-24
• 讨论24-27
• 结论27-28
• 参考文献28-32
• 综述32-40
• 参考文献37-40
• 致谢40-41

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1 那荣威;载抗菌肽（KSL-W）微球的缓释研究[D];大连医科大学;2015年

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本文编号：622716