生物钟基因Per1对Cyclins-CDKs-CKIs细胞周期网络的调控作用及抑癌机理

发布时间：2017-08-08 09:17

  本文关键词：生物钟基因Per1对Cyclins-CDKs-CKIs细胞周期网络的调控作用及抑癌机理

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【摘要】：目的:探讨生物钟基因Per1对细胞周期相关基因的调控作用,以及对人口腔鳞癌细胞SCC15增殖、凋亡、细胞周期和体内成瘤的影响。方法:构建3组针对Per1 RNA的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒重组质粒,转染SCC15细胞,用Western-blot及实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,QRT-PCR)检测筛选干扰效果最佳组为实验组,对照组(Control-shRNA)为对任何基因均无干扰效应的慢病毒质粒,空白组为未做任何处理的SCC15细胞。用QRT-PCR检测各组细胞中细胞周期相关基因p53、CyclinD1、CyclinE、CyclinA2、CyclinB1、CDK1、CDK2、CDK4、CDK6、p16、p21、Wee1、cdc25、E2F、Rb1 mRNA的表达;用流式细胞仪检测各组细胞增殖、凋亡和细胞周期分布;将实验组和空白组细胞分别接种于裸鼠背部皮下,观察成瘤情况。结果:成功构建了3组Per1-shRNA慢病毒质粒,通过QRT-PCR和Western-blot证明Per1-shRNA-I组沉默效果最佳,作为实验组。Per1-shRNA-I组细胞中CyclinD1、CyclinE、CyclinB1、CDK1和Wee1mRNA的表达水平较Control-shRNA和SCC15组显著增高(P0.05),而p53、CyclinA2、p16、p21和cdc25 mRNA的表达水平显著降低(P0.05),Control-shRNA和SCC15组细胞中各基因mRNA的表达水平无差异(P0.05),CDK2、CDK4、CDK6、E2F和Rb1 mRNA的表达水平在3组中均无显著改变(P0.05);与Control-shRNA和SCC15组比较,Per1-shRNA-I组中细胞增殖指数显著增高(P0.05),凋亡指数显著降低(P0.05),S期的细胞数显著降低(P0.05),G2/M期的细胞数显著增加(P0.05),而Control-shRNA和SCC15组细胞的增殖指数、凋亡指数及细胞周期分布无差异(P0.05);Per1-shRNA-I组细胞体内成瘤能力显著增强(P0.05)。结论:生物钟基因Perl是重要的抑癌基因,Perl能调控下游众多的细胞周期基因,其表达变化影响细胞细胞周期进程、增殖和凋亡的平衡失调及体内成瘤能力,对Per1深入研究有可能进一步明确癌症的发生发展机制,为癌症的治疗提供新的有效分子靶点。
【关键词】：生物钟 Per1 细胞周期基因 口腔癌
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.8
【目录】：

• 英文缩略语名词对照4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 第一部分 PER1短发夹RNA（PER1-SHORT HAIRPIN RNA，，SHRNA)慢病毒干扰质粒载体构建和鉴定13-18
• 1 材料与方法13-16
• 1.1 材料13-14
• 1.2 方法14-16
• 1.3 统计学分析16
• 2 结果16-18
• 第二部分 PER1对CYCLINS-CDKS-CKIS细胞周期网络的调控作用18-28
• 1 材料与方法18-23
• 1.1 材料18-19
• 1.2 方法19-23
• 2 结果23-28
• 第三部分 沉默PER1基因对口腔鳞癌SCC15细胞体内成瘤能力的影响28-30
• 1 材料与方法28
• 1.1 材料28
• 1.2 方法28
• 2 结果28-30
• 讨论30-32
• 全文总结32-33
• 参考文献33-38
• 文献综述38-49
• 参考文献43-49
• 致谢49-50
• 攻读硕士学位期间发表论文目录50

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 叶华;杨凯;谭雪梅;赵丹;吕晓强;王青青;;钟基因Per2和肿瘤相关钟控基因在金黄地鼠口腔颊黏膜癌变不同阶段的昼夜节律改变[J];华西口腔医学杂志;2015年05期

2 谭雪梅;叶华;杨凯;陈丹;唐洪;;鼠口腔黏膜癌变过程中生物钟基因Per1与细胞周期基因昼夜节律的表达[J];中华口腔医学杂志;2015年07期

3 赵宁波;杨凯;陈丹;唐洪;赵丹;赵春蓉;;生物钟PER1基因在口腔鳞癌中的昼夜节律变化及与体内肿瘤生长的关系[J];第三军医大学学报;2013年14期

4 赵春蓉;杨凯;赵宁波;唐洪;;生物钟Per1基因在人颊部鳞状细胞癌中的表达及临床意义[J];重庆医科大学学报;2013年02期

本文编号：639230