Noggin及BMP2基因对ADSCs和BMSCs成骨分化能力的影响及比较研究

发布时间：2017-08-12 09:16

  本文关键词：Noggin及BMP2基因对ADSCs和BMSCs成骨分化能力的影响及比较研究

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【摘要】：目的： 本实验尝试在体外环境下下调细胞中Noggin基因和增加BMP2基因，观察对脂肪干细胞(ADSCs)和骨髓干细胞(BMSCs)成骨分化能力的影响及两种干细胞成骨分化能力的比较。 方法： 使用脂质体将NogginshRNA和BMP2基因共同转染取自同一只SD大鼠的BMSCs和ADSCs中，并进行成骨诱导。分别在3、7、14天三个时间点，采用Realtime-PCR技术检测成骨相关基因的表达，并通过茜素红染色法检测其成骨分化能力。 结果： 1. ADSCs和BMSCs细胞形态学观察显示：成功从同一只SD大鼠中取得ADSCs和BMSCs，并观察其成骨、成脂诱导后茜素红染色和油红O染色。 2. Realtime-PCR结果显示：3、7、14天ADSCs及BMSCsBMP2基因的表达趋势相同，BMP2组BMP2基因的表达明显高于EGFP组（对照组）（P0.01），而BMP2+NogginshRNA组BMP2基因的表达明显高于BMP2组（P0.01）。 3. Realtime-PCR结果显示：转染3、7、14天后ADSCs实验组（BMP2、BMP2+NogginshRNA）Runx2、Col1、ALP、Sp7成骨基因的表达与对照组（EGFP）相比均显著升高（P0.01）。而BMP2+NogginshRNA组Runx2、Col1、ALP、Sp7成骨基因的表达与BMP2组相比均显著升高（P0.01）。同样地，转染3、7、14天后BMSCs实验组（BMP2、BMP2+NogginshRNA）Runx2、Col1、ALP、Sp7成骨基因的表达与对照组（EGFP）相比显著升高（P0.05）。而BMP2+NogginshRNA组Runx2、Col1、ALP、Sp7成骨基因的表达与BMP2组相比显著升高（P0.05）。 4.茜素红染色结果显示：EGFP组、BMP2组、BMP2+NogginshRNA组钙结节量明显呈现递增趋势。定量分析结果显示呈递增趋势，有统计学意义（P0.01）。BMSCs形成的钙结节明显大于ADSCs，，有统计学意义（P0.01）。 5.Realtime-PCR结果显示：BMP2基因和Noggin基因沉默共同修饰后BMSCs成骨基因Runx2、Col1、ALP、Sp7的表达与同等条件下的ADSCs相比均显著上调（P0.01）。BMP2基因和Noggin基因沉默共同修饰后的ADSCs3、7、14天BMP2基因的表达与对照组（EGFP组）的BMSCs相比均显著上调（P0.01），而成骨基因Runx2、Col1、ALP、Sp7的表达却显著下调（P0.01）。 结论: 1.BMP2基因及NogginshRNA共同作用的干细胞BMP2的表达及成骨分化能力优于BMP2单基因作用的干细胞； 2.BMP2基因及NogginshRNA修饰下BMSCs的成骨能力优于ADSCs； 3.不经基因修饰的BMSCs成骨能力优于BMP2基因及NogginshRNA修饰的ADSCs。
【关键词】：脂肪干细胞 骨髓间充质干细胞 BMP2 Noggin 成骨分化
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R78
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 目录8-10
• 缩略词表10-12
• 第1章 引言12-19
• 1.1 前言12-13
• 1.2 文献综述13-19
• 1.2.1 干细胞在骨组织工程中的应用13-16
• 1.2.2 关于成骨分化的信号通路16-17
• 1.2.3 BMP信号通路及其拮抗剂在骨组织工程中的研究进展17-18
• 1.2.4 本实验的研究目的18-19
• 第2章 正文19-36
• 2.1 材料与方法19-26
• 2.1.1 实验动物19
• 2.1.2 主要材料与试剂19-20
• 2.1.3 主要仪器设备20
• 2.1.4 试剂配制20-21
• 2.1.5 实验方法21-26
• 2.1.6 统计学分析26
• 2.2 实验结果26-33
• 2.2.1 ADSCs和BMSCs细胞形态学观察26-27
• 2.2.2 ADSCs和BMSCs成骨、成脂诱导分化27-28
• 2.2.3 EGFP的表达28
• 2.2.4 Noggin基因沉默的表达28-29
• 2.2.5 BMP2基因和Noggin基因沉默对ADSCs和BMSCs成骨分化的影响29-31
• 2.2.6 ADSCs与BMSCs成骨能力的比较31-33
• 2.3 讨论33-36
• 第3章 结论36-37
• 参考文献37-44
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果44-45
• 致谢45

【参考文献】

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本文编号：660833