“七叶一枝花—壳聚糖”混合物作为义齿稳固剂的生物相容性研究

发布时间：2017-08-14 08:17

  本文关键词：“七叶一枝花—壳聚糖”混合物作为义齿稳固剂的生物相容性研究

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【摘要】：目的通过检测“七叶一枝花-壳聚糖”混合物对小鼠成纤维细胞L929的细胞毒性、细胞周期和凋亡的影响及对金黄地鼠口腔黏膜的刺激性,评价其生物相容性,为临床探索新的义齿稳固剂提供实验依据。方法1“七叶一枝花-壳聚糖”混合物及浸提液的制备:将经水煎法提纯的七叶一枝花粉剂0.156g溶于100ml纯水中搅拌溶解,在连续搅拌下缓慢加入经γ射线消毒后的水溶性壳聚糖2g,搅拌混匀后得到浅棕色透明混合物,每次实验均需配制新溶剂。以含10%胎牛血清的RPMI1640完全培养基为浸提介质,将“七叶一枝花-壳聚糖”混合物按0.1g/ml的标准放入浸提介质中,37℃条件下、浸提24h。2L929细胞培养及绘制细胞生长曲线:细胞复苏后,用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基在37℃、5%CO2的培养箱中培养细胞并传代。将细胞制成10种不同浓度的细胞悬液接种于96孔板进行培养,分别在培养24h、48h、72h、96h、120h、144h和168h后用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测其光密度值(OD值),根据各组均值绘制细胞生长曲线。3 MTT实验:用根据细胞生长曲线确定的最佳细胞浓度接种96孔板,MTT比色法测定不同浓度“七叶一枝花-壳聚糖”混合物的浸提液培养L929细胞24h、48h、72h和96h的OD值,统计分析不同浓度浸提液在不同时间对L929细胞增殖的影响。4细胞周期实验:利用流式细胞仪检测阴性对照组、“七叶一枝花-壳聚糖”混合物浸提液组培养细胞48h后L929细胞周期的差异。5细胞凋亡实验:阴性对照组、“七叶一枝花-壳聚糖”混合物浸提液组培养细胞48h后,分别对细胞进行Annexin V,PI双染色,利用流式细胞仪测定各组的细胞凋亡率。6口腔粘膜刺激试验:制备“七叶一枝花-壳聚糖”混合物及浸提液,10只金黄地鼠随机分为实验组和对照组,分别将浸有“七叶一枝花-壳聚糖”混合物的浸提液、p H为2的醋酸和生理盐水的棉球置于地鼠中央颊粘膜极低处,分别于1h、4h、6h、8h后肉眼观察动物有无不良反应;8h后处死动物,取与试样接触部位颊粘膜及周围结缔组织,常规组织切片,HE染色观察组织细胞有无炎性反应。结果1细胞生长曲线结果:通过细胞生长曲线的绘制可知,本实验室条件下L929细胞在第三天进入对数生长期,第五天达到增殖顶峰,第七天进入生长平台期,细胞生长曲线呈“S”形,细胞的最适生长浓度为4×104/ml。2 MTT实验结果:实验条件下,第一天,毒性级别除100%实验组为0级外,浓度25%、50%、75%、100%实验组及Protefix组均为1级;第二天、第三天和第四天,浓度25%、50%、75%、100%实验组和Protefix组均出现1级毒性反应,有极轻微细胞毒性。3细胞周期实验:48h后细胞表现出不同的生长趋势,两组细胞均为正常二倍体细胞。“七叶一枝花-壳聚糖”混合物浸提液组G2期细胞周期比例为(7.95±0.58)%,阴性对照组G2期细胞周期比例为(8.20±0.32)%,两组间差异无统计学意义(P0.05),细胞相容性良好。4细胞凋亡实验:“七叶一枝花-壳聚糖”混合物浸提液组早期凋亡率为(5.97±0.71)%,阴性对照组早期凋亡率为(5.90±1.16)%,两组间差异无统计学意义(P0.05)。5口腔粘膜刺激试验:肉眼观察实验组与阴性对照组棉球接触部位黏膜均未出现红斑、糜烂、溃疡;阳性对照组棉球接触部位黏膜粗糙,白色皱褶,周围组织红肿。组织学检查,实验组与阴性对照组上皮完整,无炎细胞浸润、无水肿及血管充血;阳性对照组黏膜上皮可见水肿、脓肿、糜烂及慢性炎细胞浸润等病理改变;固有层可见水肿,血管扩张、充血及灶性慢性炎细胞浸润。结论1本实验条件下,自制“七叶一枝花-壳聚糖”混合物对体外培养的L929细胞的增殖无毒性作用。2与阴性对照组相比,“七叶一枝花-壳聚糖”混合物对L929细胞周期和凋亡的影响无显著性差异。3“七叶一枝花-壳聚糖”混合物对金黄地鼠口腔黏膜无刺激性。说明“七叶一枝花-壳聚糖”混合物具有良好的生物相容性。
【关键词】：七叶一枝花 壳聚糖 义齿稳固剂 生物相容性
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R783
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文缩略表11-12
• 引言12-14
• 第1章 “七叶一枝花-壳聚糖”混合物对L929细胞增殖的影响14-27
• 1.1 实验材料14-15
• 1.1.1 细胞株14
• 1.1.2 主要试剂与仪器14-15
• 1.2 实验方法15-17
• 1.2.1 主要试剂的制备15
• 1.2.2 细胞培养及传代15-16
• 1.2.3 建立细胞生长曲线16
• 1.2.4 MTT法测定“七叶一枝花-壳聚糖”混合物对L929细胞的毒性16-17
• 1.3 实验结果17-20
• 1.3.1 细胞生长曲线的建立17-18
• 1.3.2“七叶一枝花-壳聚糖”混合物的毒性评级18-20
• 1.4 讨论20-23
• 1.5 结论23-24
• 参考文献24-27
• 第2章 “七叶一枝花-壳聚糖”混合物对L929细胞周期和凋亡的影响27-35
• 2.1 主要试剂与仪器27
• 2.2 实验方法27-30
• 2.2.1 主要试剂的制备27-28
• 2.2.2 细胞培养及传代28
• 2.2.3 实验分组28
• 2.2.4 接种细胞28
• 2.2.5 细胞同步化28-29
• 2.2.6 用等量浸提液置换培养基29
• 2.2.7 流式细胞仪检测29
• 2.2.8 统计学分析29-30
• 2.3 实验结果30-31
• 2.3.1“七叶一枝花-壳聚糖”混合物对细胞周期的影响30-31
• 2.3.2“七叶一枝花-壳聚糖”混合物对细胞凋亡的影响31
• 2.4 讨论31-34
• 2.4.1 “七叶一枝花-壳聚糖”混合物对细胞周期的影响31-33
• 2.4.2 “七叶一枝花-壳聚糖”混合物对细胞凋亡的影响33-34
• 2.5 结论34
• 参考文献34-35
• 第3章 “七叶一枝花-壳聚糖”混合物的口腔黏膜刺激试验35-41
• 3.1 实验材料35
• 3.1.1 实验动物35
• 3.1.2 主要试剂与仪器35
• 3.2 实验方法35-38
• 3.2.1 主要试剂的制备35-36
• 3.2.2 实验分组36
• 3.2.3 肉眼观察36
• 3.2.4 组织学观察36-38
• 3.2.5 结果评价38
• 3.3 实验结果38-39
• 3.3.1 肉眼观察38
• 3.3.2 组织学观察38-39
• 3.4 讨论39-40
• 3.5 结论40
• 参考文献40-41
• 第4章 综述 壳聚糖在口腔医学中的研究进展41-47
• 4.1 壳聚糖在口腔修复科中的应用研究41-42
• 4.2 壳聚糖在牙体牙髓科中的研究42-43
• 4.3 壳聚糖在儿牙科中的应用研究43
• 4.4 壳聚糖在口腔黏膜病科中的应用研究43
• 4.5 壳聚糖在牙周科中的应用研究43-44
• 4.6 壳聚糖在口腔外科中的应用研究44-45
• 参考文献45-47
• 结论47-48
• 附录A48-55
• 附录B55-57
• 致谢57-58
• 导师简介58-59
• 作者简介59-60
• 学位论文数据集60

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本文编号：671654