经hBMP-2基因修饰的兔BMSCs生物学活性研究

发布时间：2017-08-15 08:17

  本文关键词：经hBMP-2基因修饰的兔BMSCs生物学活性研究

  更多相关文章： 骨髓间充质干细胞 骨形态发生蛋白 慢病毒 基因

【摘要】：背景:下颌骨是位于面部下1/3的不规则骨,参与咀嚼、咬合、吞咽等重要生理活动。下颌骨的缺损修复一直是颌面外科研究的热点之一。随着组织工程学技术的飞速发展,下颌骨缺损后修复重建的治疗方法也得到了极大的进步。其中,组织工程骨技术因在下颌骨修复重建中展现出显著的优越性,已经逐渐得到广泛的认可。在组织工程学中,种子细胞、支架材料、细胞因子是其三大要素,而获得具有良好生物学活性的种子细胞是组织工程研究的基础性环节。本研究拟通过RT-PCR技术从人肝癌细胞系HepG2中获取并扩增人骨形态蛋白-2(hBMP-2)基因片段,通过酶切等技术将其插入至骨髓间充质干细胞(BMSCs)基因组中,从而增强BMP基因的表达活性,加快骨质缺损区域的修复重建,为后续实验奠定基础。目的:初步分离培养生长状态良好的兔BMSCs,检测经BMP-2基因修饰后,BMSCs中目的基因的表达水平,并探讨将其作为种子细胞修复骨缺损的可行性。方法:通过密度梯度离心法分离培养兔BMSCs,并初步检测BMSCs生物学特性。采用逆转录聚合酶链式反应(PCR)技术,从HepG2细胞中分离获取hBMP-2基因片段。目的基因片段经扩增后与载体连接,构建重组质粒,将重组质粒经慢病毒载体,并通过293T细胞介导转染BMSCs,检测转染后BMSCs细胞中BMP-2基因的mRNA和蛋白表达情况。结果:通过密度梯度离心法分离培养,得到生长状况良好,可以稳定传代的兔BMSCs;通过目的基因的提取、扩增及连接等实验过程成功构建了重组质粒载体,并成功转入兔BMSCs;经基因修饰的兔BMSCs具有向成骨方向分化的能力;经基因修饰的兔BMSCs中BMP蛋白表达量明显增加。结论:经目的基因修饰的兔BMSCs表现出良好生物学活性,为进一步的实验研究奠定了基础。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 骨形态发生蛋白 慢病毒 基因
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R782.2
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略词表10-11
• 第一章 兔BMSCs的分离培养及其分化的研究11-20
• 1 材料与方法11-13
• 2 实验结果13-18
• 3 讨论18-19
• 参考文献19-20
• 第二章 BMP-2 慢病毒载体的构建20-32
• 1 材料与方法20-25
• 2 实验结果25-30
• 3 讨论30-31
• 参考文献31-32
• 第三部分hBMP-2 基因转染BMSCs的实验研究32-42
• 1 材料与方法32-36
• 2 实验结果36-40
• 3 讨论40-41
• 参考文献41-42
• 结论42-43
• 综述 组织工程骨在颌面骨缺损修复中的应用43-56
• 参考文献53-56
• 个人简历、在学期间发表的学术论文56-57
• 致谢57

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本文编号：677129