肿瘤相关巨噬细胞诱导口腔癌细胞上皮间质转化并促其侵袭转移的机制研究

发布时间：2017-08-20 20:15

本文关键词：肿瘤相关巨噬细胞诱导口腔癌细胞上皮间质转化并促其侵袭转移的机制研究

【摘要】：口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)为最常见的口腔恶性肿瘤,癌细胞的侵袭转移与其不良预后密切相关。近年来研究发现肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)参与肿瘤发生、发展及转移,研究证实TAMs可诱导多种肿瘤细胞发生上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),进而促其侵袭转移,然而TAMs在口腔癌侵袭转移中的作用及其机制尚不明确。因此我们以口腔癌为研究对象,研究TAMs对口腔癌细胞侵袭转移能力的影响及其相关作用机制。研究目的:明确肿瘤相关巨噬细胞能否诱导口腔癌细胞发生EMT进而促其侵袭转移并初步探讨TAMs诱导EMT的生物学机制。材料与方法:首先用佛波脂(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)刺激人单核/巨噬细胞株(THP-1)促其形成TAMs并对其进行荧光标记鉴定,收集其上清液作为TAMs条件培养基培养口腔癌细胞HN4、HN6和SCC9,并对收集的TAMs条件培养基进行质谱蛋白全谱分析;其次我们采用数字基因表达谱分析初步评测TAMs作用下SCC9差异基因的表达情况,再采用实时荧光定量PCR、免疫蛋白印记技术和免疫荧光的方法分别从mRNA和蛋白质以及荧光标记的水平检测TAMs作用后三种口腔癌细胞上皮和间质标记物的表达改变,在此基础上,利用细胞划痕实验、流式细胞周期测定和细胞侵袭实验检测三种口腔癌细胞的生物学特性改变;最后,通过RT-PCR检测三种口腔癌细胞转录抑制因子的表达情况并应用Western Blot方法检测炎症重要通路NF-κB的激活状态等来探讨TAMs诱导口腔癌细胞EMT及促其侵袭转移的具体机制。结果:首先成功体外诱导TAMs,表现为原本悬浮分散于培养基中的细胞贴壁成簇,部分细胞伸出伪足,巨噬细胞标记物CD68和肿瘤相关巨噬细胞标记物CD163均有明显表达,并检测出TAMs条件培养基中含有多种炎症因子与趋化因子;其次,TAMs诱导三种口腔癌细胞HN4、HN6和SCC9发生了EMT,主要表现为:TAMs诱导铺路石样的口腔癌上皮细胞逐渐拉长转变为类似于成纤维细胞的细胞形态;无论从mRNA水平,还是从蛋白质水平,上皮标志物E-cadherin表达下降,同时间质标志物Vimentin的表达明显上升,同时TAMs可明显促进三种口腔癌细胞HN4、HN6和SCC9侵袭转移能力。最后,TAMs可能是通过调控转录抑制因子Snail,ZEB和Twist以及激活炎症信号通路NF-κB来促进口腔癌EMT的发生。结论:1.体外成功构建肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)。2.TAMs可以诱导HN4、HN6及SCC9发生上皮间质转化(EMT)并显著增强其侵袭、迁移能力。3.TAMs促进了HN4、HN6及SCC9中转录抑制因子Snail,Twist,ZEB的表达并激活了三种口腔癌细胞中NF-κB信号通路。
【关键词】：肿瘤相关巨噬细胞 口腔癌细胞 EMT 侵袭转移
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.85
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