miRNA-222对口腔鳞癌细胞株OSCC-15生物学功能影响的研究

发布时间：2017-08-22 19:34

  本文关键词：miRNA-222对口腔鳞癌细胞株OSCC-15生物学功能影响的研究

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【摘要】：目的:口腔鳞癌(oral squamous cell carcinomas OSCC)是口腔颌面部常见的恶性肿瘤之一,发病率约占口腔颌面部恶性肿瘤的80%以上~[1],且呈逐年不断上升的趋势。目前临床上口腔鳞癌的治疗方法主要包括手术切除、放疗、化疗、生物治疗等,但疗效不佳,预后较差。因此,探索口腔鳞癌新的治疗方法对口腔鳞癌患者的预后有十分重要的意义。Ambros等~[2]于1993年在线虫体内发现第一个micro RNA(miRNA),即line-4,其参与调节了线虫的发育进程。Calin等~[3]于2002年最先报道了miRNA在肿瘤发生中的作用。此后不断有研究证明miRNA在肿瘤细胞增殖、分化、凋亡过程中起到了十分重要的作用。因此,miRNA成为肿瘤诊治新的研究方向。miRNA-222是miRNA家族中重要的一员,研究发现,miRNA-222在多种肿瘤中表达异常,且miRNA-222的异常表达影响到肿瘤细胞的增殖、凋亡及迁移等生物学功能。庞新亚等~[4]发现miRNA-221、miRNA-222在肝癌组织中表达上调;陶宣辰等~[5]在Hep G2肝癌细胞系体外实验中发现,上调miRNA-222的表达时,PTEN表达受到抑制,Hep G2细胞的增殖和侵袭能力增强。Gillies和Lorimer L[6]在脑胶质细胞瘤的研究中发现,miRNA-221/222可以与p27~(kipl) m RNA的3'-UTR结合,降低p27~(kipl)的表达。当下调脑胶质瘤细胞中miRNA-221/222的表达时,p27~(kipl)的蛋白表达量上调,明显地将脑胶质细胞瘤U251细胞株阻滞在G1期,降低胶质细胞瘤细胞U251的增殖。本实验通过研究miRNA-222对口腔鳞癌细胞株OSCC-15增殖、凋亡及迁移等生物学功能的影响,探讨miRNA-222在口腔鳞癌发生发展中的作用,为口腔鳞癌的早期诊断、治疗及预后提供参考依据。方法:1口腔鳞癌细胞株OSCC-15的复苏、培养、传代及冻存。2将人工合成的miRNA-222抑制物(inhibitor)及miRNA-222模拟物(mimics)瞬时转染口腔鳞癌细胞株OSCC-15,同时设置空白对照组。3 MTS试剂盒分别于0h、24h、48h、72h处理各组细胞,酶标仪检测miRNA-222 inhibitor组、miRNA-222 mimics组及空白对照组三组细胞的吸光度值,并绘制细胞增殖曲线。4应用Annexin V/PI双染试剂盒处理各组细胞,流式细胞术分别检测miRNA-222 inhibitor组、miRNA-222 mimics组及空白对照组三组细胞凋亡率。5细胞划痕实验检测miRNA-222 inhibitor组、miRNA-222 mimics组及空白对照组三组细胞迁移率。6结果判定及统计学分析应用SPSS21.0统计软件进行统计学处理,口腔鳞癌细胞株OSCC-15细胞的吸光度值以均数±标准差(X±S)表示,采用完全随机的两独立样本t检验比较各组细胞吸光度值的差异,采用χ2检验比较各组细胞凋亡率的差异,采用完全随机的两独立样本t检验比较各组迁移率间的差异,P0.05为差异有统计学意义。结果:1 miRNA-222对口腔鳞癌细胞株OSCC-15吸光度和增殖率的影响1.1 0h时,空白对照组的吸光度值为1.318±0.061,miRNA-222inhibitor组的吸光度值为1.141±0.040,miRNA-222 inhibitor组较空白对照组降低,差异有统计学意义(P0.05);miRNA-222 mimics组的吸光度值为1.594±0.138,miRNA-222 mimics组较空白对照组升高,差异有统计学意义(P0.05)。1.2 24h时,空白对照组的吸光度值为2.128±0.150,miRNA-222inhibitor组的吸光度值为1.733±0.130,miRNA-222 inhibitor组较空白对照组降低,差异有统计学意义(P0.05);miRNA-222 mimics组的吸光度值为2.752±0.106,miRNA-222 mimics组较空白对照组升高,差异有统计学意义(P0.01)。1.3 48h时,空白对照组的吸光度值为2.426±0.124,miRNA-222inhibitor组的吸光度值为2.155±0.057,miRNA-222 inhibitor组较空白对照组降低,差异有统计学意义(P0.05);miRNA-222 mimics组的吸光度值为2.791±0.125,miRNA-222 mimics组较空白对照组升高,差异有统计学意义(P0.05)。1.4 72h时,空白对照组的吸光度值为2.806±0.163,miRNA-222 inhibitor组的吸光度值为2.423±0.053,miRNA-222 inhibitor组较空白对照组降低,差异有统计学意义(P0.05);miRNA-222 mimics组的吸光度值为3.369±0.409,miRNA-222 mimics组较空白对照组升高,差异有统计学意义(P0.05)。1.5 miRNA-222 inhibitor组0h、24h、48h、72h的增殖率分别是85.57%、81.44%、88.83%、86.35%,低于空白对照组,差异具有统计学意义(P0.01);miRNA-222 mimics组0h、24h、48h、72h的增殖率分别是120.94%、129.32%、115.04%、163.54%,高于空白对照组,但差异无统计学意义(P0.05)。2 miRNA-222对口腔鳞癌细胞株OSCC-15凋亡的影响miRNA-222 inhibitor组的细胞凋亡率为9.58%,高于空白对照组的细胞凋亡率6.11%,差异有统计学意义(P0.01);miRNA-222 mimics组的细胞凋亡率为2.25%,低于空白对照组的细胞凋亡率6.11%,差异有统计学意义(P0.01)。3 miRNA-222对口腔鳞癌细胞株OSCC-15迁移的影响24h,48h,72h,miRNA-222 inhibitor组的迁移率分别是17.9%、19.4%、20.6%,空白对照组的迁移率分别是23.7%、29.4%、36.4%,差异有统计学意义(P0.05)。miRNA-222 mimics组的迁移率分别是47.9%、67.8%、78.9%,miRNA-222 mimics组与空白对照组之间的差异有统计学意义(P0.05)。结论:miRNA-222促进口腔鳞癌细胞株OSCC-15增殖及迁移,抑制细胞凋亡,推测miRNA-222在口腔鳞癌的增殖、凋亡及迁移功能中发挥重要作用。
【关键词】：口腔鳞癌 miRNA-222 细胞增殖 细胞凋亡 细胞迁移
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.85
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文缩写11-12
• 前言12-13
• 材料与方法13-17
• 结果17-19
• 附图19-22
• 附表22-23
• 讨论23-27
• 结论27-28
• 参考文献28-31
• 综述 口腔癌中miRNA的研究进展31-41
• 参考文献37-41
• 致谢41-42
• 个人简历42

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李月秀;杨娅;肖长杰;高德安;高静;;目标miRNAs在口腔白斑癌变患者唾液中的表达研究[J];临床口腔医学杂志;2015年07期

2 陶宣辰;马东来;吴德全;;上调miR-222对肝癌细胞系HepG2增殖和侵袭能力的影响[J];实用肿瘤学杂志;2015年03期

3 李击;王萍;岑红兵;肖军;;miR-17-5p在口腔鳞状细胞癌中的表达特点及其临床意义[J];临床口腔医学杂志;2015年05期

4 顾文莉;叶冬霞;吴静静;;microRNA-125b在口腔鳞状细胞癌患者血浆中的表达及意义[J];上海口腔医学;2015年01期

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本文编号：721043