SD乳鼠髁突软骨细胞和四肢软骨细胞生物学特性比较实验研究

发布时间：2017-08-24 04:49

  本文关键词：SD乳鼠髁突软骨细胞和四肢软骨细胞生物学特性比较实验研究

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【摘要】：[目的]探讨SD乳鼠髁突软骨细胞(Mandibular Condylar Chondrocytes, MCC)和四肢关节软骨细胞的体外培养方法与生物学特性,MTT法观察不同浓度外源性转化生长因子(transforming growth factor-β 2,TGF-β2)对两种软骨细胞的增殖作用,研究0.20ng/ml的TGF-β2对髁突软骨细胞和四肢关节软骨细胞PCNA和Ⅱ型胶原蛋白的mRNA表达差异。[方法]新生3天SD乳鼠10只,提取双侧髁突软骨和四肢关节软骨,联合消化法获取软骨细胞,用15%FBS的DMEM培养液培养。通过形态学、甲苯胺蓝染色和Ⅱ型免疫组化鉴定细胞；传代第2代时,两种软骨细胞各分为三个组,分别加入不同浓度的TGF-β20.10ng/ml、 0.20ng/ml、0.40ng/ml, MTT法观察不同浓度TGF-β2对两种软骨细胞的增殖分化作用；筛选合适浓度的TGF-β2,以12h、24h、48h作为监测点,MTT检测两种软骨细胞各时间点增殖情况；RT-PCR检测在两种软骨细胞中加入0.20ng/ml的TGF-β2作用12h后PCNA和Ⅱ型胶原蛋白的mRNA的表达差异。[结果]髁突软骨细胞和四肢关节软骨细胞的原代细胞24-48h后开始贴壁,72-96h可形成单层,144h即可长满并传代；传代后,髁突软骨细胞贴壁时间为4h,四肢关节软骨细胞贴壁时间为6h；两种软骨的前3代细胞表型稳定,有较强增殖能力；第4代细胞开始出现增殖能力减弱、形成单层时间变长的现象；甲苯胺蓝染色和免疫组织化学染色显示两种软骨细胞均表达阳性,四肢关节软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白阳性表达强于髁突软骨细胞；不同浓度的TGF-β2作用髁突软骨细胞,0.2ng/ml、0.4ng/ml TGF-β2比0.1ng/ml有明显增殖促进作用,差异具有统计学意义,0.2ng/ml、0.4ng/ml TGF-β2对髁突软骨细胞作用没有明显差异；0.2ng/ml的TGF-β2对四肢关节软骨细胞是最合适的增殖浓度,而大于0.2ng/ml时则表现出部分的抑制作用；相同浓度TGF-β2作用下,髁突软骨活细胞数达到峰值为12h左右,而四肢关节软骨活细胞达到峰值在24h左右; 0.2ng/ml的TGF-β2对于两种软骨细胞中Ⅱ型胶原蛋白和PCNA中mRNA表达较对照组均增强,其中髁突软骨细胞的Ⅱ型胶原蛋白和PCNA中mRNA表达较四肢关节软骨细胞表达弱。[结论]通过本实验研究,原代髁突软骨细胞和四肢关节软骨细胞在细胞形态和生长特性上有差异,髁突软骨细胞免疫组化染色表达Ⅱ型胶原较四肢关节软骨表达弱；外源性TGF-β2对两种软骨细胞的增殖作用存在差异,相同浓度的TGF-β2对两种软骨活细胞数量达到峰值时间有差异；0.2ng/ml的外源性TGF-β2对两种软骨细胞的Ⅱ型胶原蛋白和PCNA的mRNA表达存在差异,在基因水平探讨两种细胞对于外源性的TGF-β2的刺激表达出不同的反应；进一步说明两种软骨细胞在生长特性和对生长因子反应确实存在差异。
【关键词】：髁突软骨细胞 四肢关节软骨细胞 外源性TGF-β_2
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R78;R68
【目录】：

• 符号说明6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 引言11-14
• 第一部分 对髁突软骨细胞和四肢关节软骨细胞体外培养的研究14-24
• 材料与方法14-17
• 结果17-22
• 讨论22-23
• 结论23-24
• 第二部分 外源性TGF-β_2对髁突软骨细胞和四肢关节软骨细胞增殖作用的研究24-33
• 材料24-25
• 方法25-26
• 结果26-30
• 讨论30-31
• 结论31-33
• 第三部分 外源性TGF-β_2作用下髁突软骨细胞和四肢关节软骨细胞PCNA和Ⅱ型胶原蛋白mRNA的表达33-43
• 材料与方法33-34
• 方法34-37
• 结果37-41
• 讨论41-42
• 结论42-43
• 全文总结43-45
• 参考文献45-50
• 文献综述50-57
• 参考文献55-57
• 发表文章57-58
• 致谢58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 史新立;胡X;孟祥提;;关节软骨修复与相关细胞因子的作用[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年11期

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本文编号：729298