压应力对PLGA支架上牙龈成纤维细胞COL-I和MMP-1表达的影响

发布时间：2017-08-25 05:34

  本文关键词：压应力对PLGA支架上牙龈成纤维细胞COL-I和MMP-1表达的影响

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【摘要】：目的：①建立人牙龈成纤维细胞(HGFs)PLGA三维培养及力学加载模型,探讨HGFs三维培养的方法及力学加载方式；②研究持续压应力对PLGA支架上HGFs COL-I和MMP-1的表达的影响,探讨压应力作用下牙龈组织的改建机制。方法：①采用组织块培养法对HGFs进行原代培养,取第4代HGFs鉴定细胞来源。②取第4代HGFs,制备1×105个/ml的混悬液接种于PLGA膜上,3天后对PLGA膜上的HGFs进行荧光电镜和扫描电镜观察,并采用CCK-8法对复合培养的HGFs进行细胞增殖活性检测。③取复合培养3天后的PLGA-HGFs复合体,采用重物加载方式分别对其施加大小为5、15、25、35g/cm2的压应力,以0g/cm2组作为对照,加力6h后,采用CCK-8法测定PLGA膜上HGFs的增殖活性,确定最佳加力力值。④取复合培养3天后的PLGA-HGFs复合体,对其施加以上探讨出的最佳加力力值,分别作用6、24、48、72h,以未加力、培养相同时间作为对照,分别采用RT-qPCR和ELISA法检测PLGA-HGFs复合体受力后COL-I、MMP-1 mRNA和蛋白的表达变化。结果：①培养10-14d后,可见成纤维样细胞从组织块边缘爬出。细胞来源鉴定显示该细胞为中胚层来源,证明所培养的细胞为HGFs。②荧光电镜结果显示,PLGA支架上有大量的HGFs密集生长,且同一视野中可观察到不同清晰度的细胞存在,说明细胞是生长在不同的平面上。扫描电镜结果显示,HGFs在支架上贴附紧密,细胞呈现多角形,三维方向上伸展充分,并可见基质的合成。③CCK-8结果显示：1) HGFs在PLGA膜上复合培养的第3d即进入对数生长期,且细胞的生长亦符合细胞的生长规律。2)压应力刺激以25 g/cm2力值时的OD值最大,细胞的增殖活性最好,力值过小(5 g/cm2)时,则不能起到有效地刺激细胞的作用,力值过大(35 g/cm2)则会抑制细胞的增殖。④25g/cm2压应力作用于PLGA-HGFs复合体6h后,与对照组相比,COL-I的mRNA和蛋白的表达出现短暂下调,随后开始上调,且加力时间越长,其表达量越多。MMP-1的mRNA和蛋白的表达在加力6h呈短暂上调,随后开始下调,且随着加力时间的延长,其表达量越低。结论：①采用PLGA支架可以实现对HGFs的三维培养。②采用重物加载方式对PLGA-HGFs复合体进行应力刺激,成功构建了HGFs的力学加载模型,且适宜的压应力刺激可促进HGFs的增殖,本实验模型最适宜的应力大小为25g/cm2。③压应力刺激可通过上调HGFs中COL-I的表达和下调MMP-1的表达,进而影响牙龈组织ECM的代谢。
【关键词】：人牙龈成纤维细胞 PLGA支架 压应力 Ⅰ型胶原 基质金属蛋白酶-1
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R783.5
【目录】：

• 个人简历3-6
• 英文缩略词表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 第一部分 人牙龈成纤维细胞的体外培养及鉴定14-20
• 1 主要试剂与仪器14
• 2 实验方法14-16
• 3 实验结果16-18
• 4 讨论18-20
• 5 结论20
• 第二部分 PLGA支架复合人牙龈成纤维细胞三维培养模型的建立20-35
• 1 主要试剂与仪器21
• 2 PLGA支架复合HGFs的三维培养21-24
• 3 实验结果24-28
• 4 讨论28-34
• 5 结论34-35
• 第三部分 压应力对PLGA支架上人牙龈成纤维细胞COL-I和MMP-1表达的影响35-49
• 1 主要试剂与仪器35
• 2 实验方法35-39
• 3 实验结果39-44
• 4 讨论44-48
• 5 结论48-49
• 全文总结49-50
• 参考文献50-56
• 附图56-57
• 综述57-69
• 参考文献64-69
• 临床病例报告69-80
• 致谢80-81
• 硕士期间发表论文81

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本文编号：735369