淡色库蚊核糖体蛋白S4基因克隆及其在溴氰菊酯抗性作用中的初步研究

  本文关键词：淡色库蚊核糖体蛋白S4基因克隆及其在溴氰菊酯抗性作用中的初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

《南京医科大学》 2007年

淡色库蚊核糖体蛋白S4基因克隆及其在溴氰菊酯抗性作用中的初步研究

王卫杰  

【摘要】： 【目的】克隆淡色库蚊核糖体蛋白S4(RPS4)基因的全长序列，并研究其与蚊抗药性的相关性。 【方法】根据本试验室抑制性差减杂交结合cDNA芯片筛选获得的EST片段(GenBank accession no．BE247804)设计引物，分别与载体序列配对，通过PCR的方法，从淡色库蚊抗性品系中分别扩增出目的基因的5′和3′末端，分别T／A克隆于pGT载体，转化、测序、对位拼接获取全长序列。用Clustal X、Clustal W等生物信息学软件对编码的氨基酸序列进行分析。用实时荧光定量PCR验证RPS4基因在淡色库蚊抗性、敏感品系不同发育阶段中的差异表达。应用基因重组方法构建RPS4基因的原核和昆虫表达载体；将重组的昆虫表达载体转入蚊C6／36细胞，经药物筛选获得稳定转染的细胞系，RT-PCR鉴定目的基因表达；用~3H-TdR掺入法检测稳定表达的单克隆细胞对溴氰菊酯的敏感性。 【结果】获得淡色库蚊RPS4基因的全长cDNA序列，总长度为1002 bp，，开放阅读框为789 bp，编码262个氨基酸(GenBank accessionno．DQ647667)。淡色库蚊RPS4与埃及伊蚊、冈比亚按蚊、果蝇的RPS4同源性分别为96％、91％、78％。荧光定量PCR结果显示，RPS4基因在淡色库蚊抗性和敏感品系的不同发育阶段均有表达；在蛹和成虫发育阶段，与敏感品系相比，RPS4基因在抗性品系中高表达(P＜0.01)。成功构建了RPS4基因的原核和昆虫表达载体。~3H-TdR掺入法结果显示，在一定浓度的溴氰菊酯处理下，转染RPS4基因的细胞存活率与对照组相比，无显著性差异(P＞0.05)。 【结论】本研究获得了淡色库蚊RPS4基因的全长cDNA序列。该基因在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中(蛹和成虫期)高表达，提示该基因与淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关，但其在细胞对抗溴氰菊酯的毒性作用中未发现有保护作用。

【关键词】：
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R346;R184
【目录】：

下载全文 更多同类文献

CAJ全文下载

(如何获取全文？ 欢迎：购买知网充值卡、在线充值、在线咨询)

CAJViewer阅读器支持CAJ、PDF文件格式

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 翁秋青;黄永青;刘桂荣;;重症监护病房嗜麦芽窄食单胞菌临床感染及耐药性分析[J];国际检验医学杂志;2011年13期

2 徐志霞;谢广昭;徐八一;陈宏辉;黄建云;;汕头市德国小蠊抗药性测试[J];医学动物防制;2011年08期

3 张江霞;;2010年我院抗菌药物应用调查分析[J];中国社区医师(医学专业);2011年20期

4 赵德军;胡昭宇;武静;刘彬;曹雁;田维涛;;产ESBLs及AmpC酶阴沟肠杆菌的检测及耐药性分析[J];国际检验医学杂志;2011年10期

5 赵方明;杨秋兰;;微山湖区韩庄镇淡色库蚊抗药性现状监测报告[J];中国病原生物学杂志;2011年08期

6 磨国鑫;管希周;崔俊昌;佘丹阳;陈良安;;65株鲍曼不动杆菌的临床分布和耐药特征分析[J];军医进修学院学报;2011年07期

7 陈剑;孙彦春;李新钢;;逆转肿瘤细胞对TRAIL耐药的研究进展[J];国际神经病学神经外科学杂志;2011年03期

8 余艳芳;惠燕霞;林玉萍;;262株肺炎克雷伯菌感染的临床分析[J];国际检验医学杂志;2011年08期

9 李文波;温志震;金风玲;王辉;钱兴玲;刘丽华;;铜绿假单胞菌的临床分布及β-内酰胺酶耐药表型研究[J];国际检验医学杂志;2011年09期

10 ;抑制白血病抗药性[J];中华妇幼临床医学杂志(电子版);2011年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 付彩兰;;农田抗药性杂草综合治理[A];河南省植物保护研究进展Ⅱ（下）[C];2007年

2 龚林根;张念环;张景飞;屈惠良;;二化螟抗药性综合治理技术研究初报[A];水稻螟虫灾变规律及治理对策研讨会论文集[C];2001年

3 王树礼;;抗药性及虫龄增长对棉铃虫防治的影响[A];全国安全用药技术研讨会论文集[C];2001年

4 吴华新;韩敏晖;沈群超;;棉铃虫抗药性的动态监测及综合治理[A];第十九届全国植保信息交流暨农药械交易会论文集[C];2003年

5 马德英;Kevin Gorman;Ian Denholm;罗万春;;新疆B型烟粉虱的抗药性及其治理策略[A];科技创新与绿色植保——中国植物保护学会2006学术年会论文集[C];2006年

6 鲁玉杰;石东;郭云峰;;储粮书虱抗药性及害虫再猖獗的研究现状与进展[A];华中三省（河南、湖北、湖南）昆虫学会2006年学术年会论文集[C];2006年

7 刘祥英;聂荣;刘环瑞;李琼轩;莫湿羽;;湖南省水稻褐飞虱对氯胺磷抗药性监测[A];华中昆虫研究（第6卷）[C];2010年

8 田海生;马磊;沈波;李秀兰;朱昌亮;;用SSH结合cDNA芯片分离、鉴定蚊虫抗药性相关基因[A];昆虫学创新与发展——中国昆虫学会2002年学术年会论文集[C];2002年

9 王岩;冯明鸣;刘鹏飞;刘西莉;;黄瓜霜霉病菌对烯肟菌酯敏感性及其抗药性突变体生物学性状研究[A];中国植物病理学会2005年学术年会暨植物病理学报创刊50周年纪念会论文集[C];2005年

10 杨俭美;李令媛;董波;周辉;;用比色和聚丙烯酰胺凝胶电泳法监测家蝇抗药性的初探[A];北京昆虫学会成立四十周年学术讨论会论文摘要汇编[C];1990年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 存云;[N];山东科技报;2005年

2 尤果;[N];江苏科技报;2001年

3 主持人：罗兵前 顾磊;[N];江苏农业科技报;2005年

4 农文;[N];中华合作时报;2006年

5 博种;[N];经济日报.农村版;2006年

6 实习生 初颖宇;[N];科技日报;2011年

7 天康;[N];新疆科技报(汉);2005年

8 ;[N];吉林农村报;2006年

9 马海燕 陈红霞;[N];中国绿色时报;2006年

10 ;[N];苏州日报;2006年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 公茂庆;蚊抗药性相关基因克隆与功能研究及用RNAi抑制蚊抗药性的初步研究[D];南京医科大学;2005年

2 胡小邦;视蛋白基因的克隆及其与抗药性/耐药性关系的研究[D];南京医科大学;2007年

3 潘程远;鸡枞菌与淡色库蚊及家蝇中漆酶编码基因的克隆与表达[D];浙江大学;2009年

4 陈琳;淡色库蚊击倒抗性（kdr）相关钠离子通道基因多态性研究[D];南京医科大学;2010年

5 周丹;淡色库蚊酚氧化酶proPOA3基因克隆及其与溴氰菊酯抗性关系的研究[D];南京医科大学;2012年

6 谭文彬;蚊核糖体蛋白L39基因克隆及初步功能的研究[D];南京医科大学;2007年

7 田海生;用SSH结合cDNA芯片分离、鉴定淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关基因*[D];南京医科大学;2001年

8 王波;血红素加氧酶-1活性变化对肿瘤细胞体外抗药性、体内生长影响的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年

9 贺骥;淡色库蚊核糖体蛋白L22基因(RPL22)克隆及其与溴氰菊酯抗性关系的研究[D];南京医科大学;2009年

10 高鹏;反义核酸逆转乳腺癌细胞多药耐药的研究[D];山东大学;2004年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 郝顺华;蚊抗药性相关新基因—mdr的初步研究[D];南京医科大学;2010年

2 顾春波;烟蚜的抗药性检测及机理研究[D];山东农业大学;2005年

3 胡燕;烟草黑胫病菌对烯酰吗啉的抗性风险研究[D];山东农业大学;2007年

4 帅霞;桃蚜Myzus persicae（Sulzer）对两种杀虫剂的抗药性选育及其机理研究[D];西南农业大学;2005年

5 罗伏林;山羊线虫的丙硫咪唑抗药性快速检测方法研究与四川省山羊线虫的抗药性调查[D];四川农业大学;2005年

6 张莉;江苏地区棉花烟粉虱种群研究[D];扬州大学;2008年

7 郭小芳;6株生防放线菌的生物学习性及防病抑菌作用研究[D];西北农林科技大学;2005年

8 钟立军;吉林省部分地区鸡球虫病流行病学调查及抗药性研究[D];吉林大学;2005年

9 陈利纳;不同品系烟粉虱对辛硫磷和阿克泰抗性机理研究[D];河北农业大学;2006年

10 许传勇;膀胱组织中MDR1和MRP基因表达研究[D];青岛大学;2005年

  本文关键词：淡色库蚊核糖体蛋白S4基因克隆及其在溴氰菊酯抗性作用中的初步研究，由笔耕文化传播整理发布。