天津地区麻疹病毒分子流行病学的初步研究

发布时间：2020-11-10 02:20

　　 目的：了解天津市麻疹病毒(measles virus,MV)流行株的基因型并在本实验室建立分子病毒学的研究方法。方法：将2002年天津市的麻疹散发病人尿液标本中分离到的麻疹病毒12株用EB病毒转化的绒猴淋巴细胞(B95a细胞)复苏后，提取其总RNA，采用逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)方法扩增出核蛋白(N)基因碳末端590个核苷酸片段，用BcnⅠ内限酶进行限制性片段长度多态性分析(RFLP)后，选取了3株与PMD-18T Vector构建重组质粒。对重组质粒进行核酸序列测定，并对N基因碳末端456个核苷酸进行序列系统树分析。结果：RT—PCR后12份均检测出590bp的特异性N基因目的条带，经RFLP后，显示两种类型的谱带。通过对3株病毒重组质粒的序列测定和分析证明，3株均为麻疹病毒H1基因型，其中1株为H1b亚型，另外两株为H1a亚型。H1a的2株的456个核苷酸与H1b株的差异为3.07～4.17％。这3株的456个核苷酸与A基因型代表株序列的基因差异为6.36～7.23％，与H1基因型代表株的基因差异为1.53～2.41％。3株与A基因型代表株序列相比氨基酸有义突变共达16处。结论：2002年天津市麻疹散发病例的核酸序列为H基因型，本研究中所建立的实验方法可用于今后继续监测我市麻疹流行株的基因变异，对我国加速麻疹控制及麻疹消除、消灭是十分必要的。
【学位单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2003
【中图分类】：R181.3
【部分图文】：

用QiagenRNA抽提试剂盒提取的RNA，以RNA单链为模板，用引物Pl和PZ扩增N基因片段，12份都产生了预期的590bp特异产物带，阴性对照不被该引物所扩增。说明存在特异的RNA序列，电泳结果如图1所示。

将麻疹病毒N基因片段用内切酶Bcnl经酶切后，12份中MV-9得到两个290bp左右的片段，其余11份均被切为约290bp、80bp、230bp的三个片段。以加入去离子水为阴性对照，电泳结果如图2所示。

(二)PCR产物的纯化及含量估计经Promega公司的PCR产物纯化试剂盒提纯的DNA溶于去离子水中，琼脂糖凝胶电泳如图3。鉴于条件所限，没有通过检测其吸光度估计含量。
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本文编号：2877319