二氯异氰尿酸钠灭活MS2噬菌体效果及机理的初步研究

发布时间：2018-11-28 08:30

【摘要】： 目的： 为MS2噬菌体替代脊髓灰质炎病毒Ⅰ型(PV-Ⅰ)疫苗株作为指示病毒用于消毒剂效果评价提供进一步的理论和实验依据，试验观察MS2噬菌体的部分生物学特性以及对二氯异氰尿酸钠消毒剂(NaDDC)的抵抗力，并在此基础上进一步研究二氯异氰尿酸钠作用MS2噬菌体的灭活机理。 方法： 本研究分为两部分： 1．MS2噬菌体的部分生物学特性研究： 1．1 MS2噬菌体增殖特性的研究：方法参照文献作适当改动进行研究。按照感染复数(MOI)分别为0.0001、0.001、0.01、0.1、1和10加入噬菌体纯培养液和宿主菌，37℃160r／min培养4h后，测定噬菌体滴度；加入噬菌体及宿主菌，使MOI=10，37℃温育15 min后，进行一步生长实验，于各时间取样300μl测定上清中噬菌体滴度； 1．2 MS2噬菌体最佳感染复数的研究：参照Lu等的方法，略有改动。 1．3 MS2噬菌体的宿主菌范围研究：主要采用双层琼脂法测定MS2噬菌体对各试验菌株的感染裂解情况，观察MS2噬菌体的噬菌斑生长情况并计数，并初步比较MS2噬菌体在相关宿主菌内的易感性。 1．4 MS2噬菌体对消毒剂抵抗力的研究：采用悬液定量灭活试验、中和剂鉴定试验、噬菌体的检测采用双层琼脂法，实验参照消毒技术规范(2002版)规定，并作适当修改；选择二氯异氰尿酸钠消毒剂，观察其灭活MS2、噬菌体的效果。 2．二氯异氰尿酸钠消毒剂灭活MS2噬菌体机理的研究： 2．1 NaDDC消毒剂对MS2噬菌体核酸影响的研究：采用RT-PCR技术，使用prime premier软件设计引物，并通过blastn比对以及预试验检验引物特异性，观察消毒剂灭活MS2噬菌体后，其四个基因是否发生改变； 2．2 NaDDC消毒剂对MS2噬菌体结构蛋白影响的研究：使用透射电镜观察消毒剂灭活MS2噬菌体后，病毒形态结构是否发生改变，病毒对性菌毛的吸附性是否仍然存在；采用血清中和试验观察MS2噬菌体经二氯异氰尿酸钠作用后，是否丧失抗原性。方法分别参考相关文献，并做改进。 结果： 1 MS2噬菌体的部分生物学特性研究： 1．1 MS2噬菌体的增殖特性：一步生长曲线结果表明MS2噬菌体感染宿主菌大肠杆菌ATCC15779的潜伏时间约为20min，爆发时间约为90min，裂解量为77； 1．2 MS2噬菌体最佳感染复数：MS2噬菌体感染其宿主菌的最佳感染复数在0.001～0.01之间； 1．3 MS2噬菌体的宿主菌范围：宿主菌范围研究中选择的八种细菌中，大肠杆菌ATCC 15597、大肠杆菌285和大肠杆菌B这三种菌为MS2噬菌体的宿主菌，MS2噬菌体对这三种宿主菌易感性由高到低顺序为：大肠杆菌ATCC 15597＞大肠杆菌285＞大肠杆菌B。 1．4 MS2噬菌体对消毒剂的抵抗力：消毒剂灭活MS2噬菌体结果如下，300mg／L的二氯异氰尿酸钠与MS2噬菌体作用40min，MS2的LIV为2.14Log10；400mg／L的二氯异氰尿酸钠与MS2噬菌体作用40min LIV为2.60Log10；500mg／L的二氯异氰尿酸钠与MS2噬菌体作用20min LIV可达到4.39Log10；600mg／L的二氯异氰尿酸钠与MS2噬菌体作用5min LIV分别可达到5.33 Loa10；700mg／L的二氯异氰尿酸钠与MS2噬菌体作用5min的LIV为＞5.80Log10。 2二氯异氰尿酸钠消毒剂灭活MS2噬菌体机理的研究： 2．1 NaDDC消毒剂对MS2噬菌体核酸影响的研究：RT-PCR试验结果表明，，完全灭活的600mg／L 10min和800mg／L5min两个消毒剂浓度灭活MS2噬菌体后，其四个基因均被破坏； 2．2 NaDDC消毒剂对MS2噬菌体结构蛋白影响的研究：MS2噬菌体被完全灭活后，在电镜下观察到，MS2断裂成直径约10nm大小的不规则的圆形碎片，丧失吸附能力，无法吸附在宿主菌性菌毛上。对MS2噬菌体抗原性影响的血清学实验：MS2噬菌体被完全灭活后，丧失其抗原性。 结论： 1 MS2噬菌体的部分生物学特性研究： 1．1 MS2噬菌体感染宿主菌大肠杆菌ATCC15779的潜伏时间短； 1．2最佳感染复数在0.001～0.01之间； 1．3对宿主菌大肠杆菌ATCC15779的易感性最高； 1．4二氯异氰尿酸钠对MS2噬菌体可起到良好的灭活作用。 2二氯异氰尿酸钠消毒剂灭活MS2噬菌体机理的研究； 2．1二氯异氰尿酸钠灭活MS2噬菌体后，其四个基因均被破坏； 2．2蛋白质外壳的形态发生了改变，断裂成圆形碎片，并丧失了吸附宿主菌性菌毛的能力，抗原性也丧失了。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：四川大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R187

【参考文献】

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本文编号：2362354