人双埃可病毒（HPeVs）的分子流行病学研究

发布时间：2019-09-02 07:01

【摘要】： 目的: 建立HPeV的实验室检测方法,在住院腹泻患儿和无症状儿童中开展HPeV的检测工作,初步掌握HPeV在兰州地区住院腹泻患儿和无症状儿童中的流行特征;探讨不同HPeV基因型与急性胃肠炎之间的关系,为进一步揭示和阐明婴幼儿重症腹泻的病因构成及HPeV的病原学特点奠定基础。 方法: 研究对象选自2006年7月至2007年6月间,兰州大学第一医院儿科因重症腹泻而住院的286名5岁以下儿童作为病例组;以及兰州大学第一医院儿童体检中心同期进行例行体检的98名无临床症状的5岁以下儿童作为对照组,进行病例对照研究。兰州大学第一医院儿科负责收集每位研究对象的粪便标本并填写相关标本采集表后低温运送至中国CDC病毒所。粪便标本经提取核酸后通过Real-time RT-PCR检测HPeV。从中选取一例HPeV阳性标本的Real-time RT-PCR产物经体外转录成RNA标准品,用以对HPeV核酸浓度进行定量。使用基于VP3/VP1基因连接区的两对引物进行巢式RT-PCR扩增,通过对扩增产物进行测序分型。使用MEGA3.1序列分析软件对测序结果进行基因序列分析和绘制系统进化树;采用SPSS13.0统计分析软件对研究结果和临床资料进行统计分析。 结果: 在本研究中,共检出HPeV阳性标本99例,其中病例组检出84例,检出率为29.4%(84/286);对照组检出15例,检出率为15.3%(15/98)。在病例组84例HPeV阳性标本中,HPeV1共发现43例,占51.2%,其余分别为HPeV3,25例(29.8%),HPeV4,4例(4.8%), HPeV6,2例(2.4%),HPeV8,1例(1.2%),未分型标本,9例(10.7%);在对照组15例HPeV阳性标本中,HPeV1共发现8例,占53.3%,其余分别为HPeV3,3例(20.0%),HPeV4,3例(20.0%),HPeV5,1例(6.7%)。HPeV2和HPeV7均未检测到。HPeV1感染好发于秋冬季节,HPeV3感染好发于秋季;与HPeV1和HPeV3感染患儿年龄相比,HPeV4感染患儿年龄较小。病例组中71.4%(60/84)的HPeV感染患儿为混合感染,对照组中HPeV感染患儿混合感染率为13.3%(2/15),二者差异有统计学意义(p0.05),轮状病毒和人杯状病毒为最常见的混合感染病毒。病毒载量最高的两份HPeV阳性标本均为对照组儿童,病例组和对照组间HPeV1、3、4基因型病毒载量差异无统计学意义(p0.05)。VP3/VP1基因进化分析发现,有一份毒株(No.49330)无法被分型,它与相临参考株的氨基酸同源性分别为89.41%和67.44%。对不同组间临床症状比较发现,差异无统计学意义(p0.05),HPeV1和HPeV3感染并不能加重腹泻患儿的临床症状。 结论: HPeV在兰州地区腹泻住院患儿和无症状儿童粪便标本中的检出率均较高,且有多种基因型在流行。研究结果提示,HPeV1和HPeV3可能并不是5岁以下儿童胃肠炎的致病原。因此,推测HPeV1和HPeV3可能是胃肠道(gastrointestinal,GI)中的机会性致病原,当机体感染其他病毒时才被激活而致病。
【图文】：

得一份 HPeV 阳性标本 Real-time RT-PCR 为 marker；第 1 泳道 Real-time RT-PCR 扩增产鉴定和基因测序：：取 1.5mlEP 管，加入 1ul pGEM连接酶 1ul，，3ul 纯化 DNA，混匀，：取 33ul DH5α 感受态细胞加入连钟，将 EP 管放入 42℃水浴热激 90 秒4 分钟，每管加入 60ulLB 培养液体基布于已涂布 IPTG（8ul）和 X-gal（4脂平板上，将平板置于室温至液体和提取及鉴定：从蓝白斑筛选平板l氨苄青霉素的LB培养基中，37℃剧Plasmid Mini Kit 试剂盒提取质粒,方

质粒的酶切鉴定电泳图
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R181.3

【共引文献】

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本文编号：2530780