黄果茄中生物碱的提取分离、结构剖析及生物活性研究

发布时间：2020-02-02 00:09

【摘要】： 研究背景: 血吸虫病是一种严重危害人类健康和社会经济发展的重大传染性疾病,自上世纪90年代末以来,我国日本血吸虫病疫情呈明显的上升趋势。钉螺是日本血吸虫的唯一中间宿主,因此控制钉螺是血吸虫病防治的关键技术之一。氯硝柳胺是WHO唯一推荐的化学灭螺药物,由于其存在对鱼毒性大、价格高等弊病,研发WHO标准(高效、持久、安全及价廉)的新型植物灭螺药物替代氯硝柳胺是国内外研究的热点。由于缺乏对植物灭螺成分单体水平的构效关系、环境安全及经济性的同步研究,以致尚未研究出一种符合WHO标准的植物灭螺药物。研究的目的和意义: 从资源丰富的黄果茄果实中提取分离有效的生物碱单体,通过其结构和生物活性的研究,为创制WHO标准的新型灭螺药物提供设计依据和物质基础。研究的方法和结果: SX原粉的生物选择活性:使用SX原粉依照WHO试验法研究,150μm的90mg·L~(-1)浸泡1h抑螺87.3%;38、23、18及13μm的25mg·L~(-1)浸泡72h灭螺＞76.7%;150μm的30mg·L~(-1)浸泡96h斑马鱼死亡10%。结果说明:SX是一种抑灭螺活性高和对鱼毒性低的灭螺植物。 SX生物碱的提取分离和结构剖析:SX原粉经95%EtOH水浴浸提和CH_3COOCH_2CH_3萃取、TLC和CCL层析的分离纯化,得到SX-1和SX-2碱性单体,显微观察和TLC与HPLC检测,其纯度分别为97.89%和98.71%;经EA、MS、IR、UV-VIS及NMR检测分析,SX-1的分子量为883,SX-2的分子量为867,结构解析进行中。 SX生物碱的灭螺及抑制其GOT活性:依照WHO试验法研究,20mg·L~(-1)SX-1和3mg·L~(-1)SX-2浸泡72h灭螺均为100%,SX-2灭螺活性显著高于SX-1;从钉螺软体组织中制备GOT,在经L_25(5~6)确定的最佳反应条件(酶浓度0.2 mg·L~(-1)、底物浓度2.5umo1·L~(-1)、反应时间15min、反应温度40℃、反应体系pH6.0)下,10 mg·L~(-1)和0.625mg·L~(-1)的SX-2对钉螺GOT活性分别为15.4%(抑制)、-23.3%(诱导)。 SX生物碱的抑菌抑癌生长活性:使用平板抑菌法,50 mg·L~(-1)对棉花枯萎菌、水稻纹枯菌、黄瓜灰霉菌、小麦赤霉菌、苹果轮纹菌及棉花炭疽菌48h的生长抑制率SX-2(21.05、23.38、28.26、29.63、32.08、13.64%)高于SX-1(10.53、23.08、4.35、14.81、24.53、10.82%):经显微观察和MTT法检测,hela细胞形态损伤程度SX-2显著高于SX-1,其5mg·L~(-1)和20mg·L~(-1)的生长抑制率分别为40.2%和96.8%。
【图文】：

生活史,日本血吸虫

图1日本血吸虫的生活史FiglLifeeycleofSchistosOmaj’tZPOnicum

显微图,晶体,分离纯化,总生物碱

得率1.2%。sX总生物碱经TLC和CCL分离纯化，得三种组分sX一1、SX一2、SX一3，SX总生物碱各组分用结晶法无法彻底分离纯化，80%EtOH溶剂有l是体析出，，晶形不均一，经TLC检测为SX一1和SX一2的混合物。三种分离纯化方法，CCL效果最好。3.2Sx-1的纯度与结构3.2.1纯度检洲·12.1.1晶体显徽观察经显微镜观察，SX一1化合物呈针状结晶，其形状均一，可以初步判断SX一1化合物为单体。其晶体显微效果如图2所示。3.2.1.2TLC检测经TLC检测，分离纯化后的SX一1在薄层板上呈单一斑点，Rf值为:Rfsx一0.075，说明SX一1化合物为单体。薄层层析效果如图3所示。
【学位授予单位】：华中师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R184

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