血水草生物碱对钉螺肝脏损伤机理的研究

发布时间：2017-06-07 21:12

  本文关键词：血水草生物碱对钉螺肝脏损伤机理的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】： 血水草Eomecon chionantha Hance)是罂粟科(Papaveraceae)白屈菜族(Chelidonium)血水草属(Eomecon)多年生野生草本植物,为我国特有的单属、种植物,资源丰富,具有多种药理作用。已证实从血水草根及根茎中提取的生物碱(Eomecon chionantha alkaloids, ECA)有较好的杀灭钉螺作用,是一种具有开发前景的植物杀螺剂。进行ECA灭螺的机理研究将为血水草作为植物杀螺剂的应用提供科学依据。 本研究是国家自然科学基金及长沙市科技局项目的部分研究内容。以钉螺肝脏为样本,探讨ECA杀螺机理。实验依照WHO规定的“杀螺剂实验室终筛方法”的浸泡法,分别用10mg/L ECA和清水浸泡钉螺36h,解剖活螺,分离肝脏：①测定钉螺肝脏总蛋白质和糖原含量,丙二醛(MDA)水平,丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性；②建立针对钉螺肝脏蛋白质组阵列分离的双向电泳方法,分离钉螺肝脏蛋白质,筛选差异蛋白质点,并予质谱鉴定；③提取肝细胞DNA,进行DNA琼脂糖凝胶电泳；④捣碎肝组织,获取肝细胞悬液,经流式细胞术分析ECA诱导钉螺肝细胞凋亡的状况。研究获得了如下主要结果： (1)ECA浸泡后钉螺肝脏总蛋白质和糖原含量均显著降低,AKP、ALT、AST、LDH酶活性明显下降,与清水对照组相比,均存在显著性差异(P0.05)；而ACP及MDA的活性差异不具有显著性(P0.05)。 (2)成功建立了钉螺肝脏蛋白质双向电泳方法,获得了分辨率高、重复性好的双向电泳图谱,经ImageMaster 2D 5.0软件分析,ECA处理组和清水对照组分别检测到354±10个和311±12个蛋白质点(n=3)；质谱鉴定获得假定蛋白、ENSANGP00000022175蛋白、醛脱氢酶、未知蛋白、ENSANGP00000027067蛋白、类似锚蛋白3的1亚型4亚亚型蛋白、相似A型肝炎病毒短型细胞受体1的蛋白、线粒体异柠檬酸脱氢酶2样蛋白、类似角蛋白的蛋白、角蛋白10、角蛋白1共11个蛋白质点,这些蛋白质均为ECA处理后表达上调的蛋白质。 (3)ECA处理后钉螺肝细胞DNA琼脂糖凝胶电泳未观察到典型DNA Ladder图谱；经流式细胞仪检测ECA处理组和清水对照组的钉螺肝细胞早期凋亡细胞率分别为13.77%与13.70%；晚期凋亡细胞率分别为10.74%与10.62%；则总凋亡率分别为24.51%和24.32%,差异无统计学意义(P0.05)。 从以上研究结果得出如下结论：(1)ECA抑制钉螺肝脏AKP、ALT、AST、LDH酶活性,影响钉螺肝脏糖及蛋白质代谢,破坏代谢平衡,导致肝功能紊乱是钉螺死亡的重要原因之一。(2)成功建立了钉螺肝脏蛋白质双向电泳条件。 (3)ECA作用后钉螺肝脏蛋白质表达发生改变。成功鉴定的11个差异蛋白质点,为进一步研究ECA对钉螺肝脏的损伤机理提供了重要线索。 (4)初步证实细胞凋亡不是ECA诱导钉螺肝细胞死亡的主要途径。
【关键词】：血水草生物碱 钉螺 肝脏 酶 蛋白质组学
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R184
【目录】：

• 中文摘要3-6
• 英文摘要6-11
• 引言11-14
• 1 文献综述14-24
• 1.1 血水草生物碱的化学组成14-17
• 1.2 血水草生物碱的药理作用17-18
• 1.3 血水草生物碱主要成分的药理作用18-23
• 1.4 结语23-24
• 2 血水草生物碱致钉螺肝脏糖、脂、总蛋白和酶活性的变化24-38
• 2.1 材料与方法24-29
• 2.2 实验结果29-33
• 2.3 讨论33-38
• 3 血水草生物碱致钉螺肝脏蛋白质差异表达分析38-65
• 3.1 材料与方法38-49
• 3.2 实验结果49-59
• 3.3 讨论59-65
• 4 血水草生物碱诱导钉螺肝脏细胞凋亡的检测65-73
• 4.1 材料与方法65-68
• 4.2 实验结果68-70
• 4.3 讨论70-73
• 结论73-74
• 参考文献74-79
• 附录79-80
• 中英文缩略词对照表80-81
• 致谢81-82

【引证文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 黄炳生;李明亚;;植物源灭钉螺药的研究进展[J];中药材;2012年06期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 郭丹钊;分离自商陆的根际真菌SL-30杀灭钉螺作用研究[D];江苏大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 彭飞;血水草白屈菜红碱灭螺效果及对钉螺肝脏损伤机理的研究[D];湖南师范大学;2012年

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本文编号：430328