肺炎克雷伯菌医院血流感染暴发的分子流行病学研究

发布时间：2017-06-28 15:00

  本文关键词：肺炎克雷伯菌医院血流感染暴发的分子流行病学研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 医院感染暴发即在医疗机构或其科室中,短时间内发生3例以上同种同源医院感染事件的现象。医院感染暴发,病死率高,易引起公众的普遍关注。为了有效地控制感染的流行,必须迅速查明感染源,目前公认的查找感染源的方法是分离病原菌并对其同源性进行分析。本研究选取一起近期医院血流感染暴发事件分离的肺炎克雷伯菌株,应用抗生素药敏试验,脉冲场凝胶电泳和多位点序列分析的方法对病原体进行同源性分型,为及时有效的控制感染的流行提供依据。 方法 1、菌株来源和药敏试验：试验菌株分离自天津市某医院外科病房2010年7月16日至7月28日5名医院血流感染患者的8株肺炎克雷伯菌临床株(Kpl-Kp8)；对照菌株分离自同期天津市另一家医院感染科病房的6株肺炎克雷伯菌临床株(Kp9-Kp13)。采用琼脂纸片扩散法(K-B法)和微量肉汤稀释法(MICs)检测肺炎克雷伯菌临床株对11种常用抗菌药物(氨苄西林、头孢唑林、庆大霉素、头孢哌酮、环丙沙星、头孢曲松、阿莫西林/克拉维酸、美罗培能、哌拉西林、复方磺胺甲恶唑、氨曲南)的耐药性。 2、脉冲场凝胶电泳(PFGE):提取肺炎克雷伯菌全基因组DNA,经限制性内切酶Xbal酶解后进行肺炎克雷伯菌全基因组DNA的脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析。 3、多位点序列分析(MLST):从试验株中选取菌株Kp1及另2株Kp4,Kp5;从对照株中选取2株Kp9和K13,共5株肺炎克雷伯菌临床株,分别扩增其7个管家基因(rpoB,gapA,mdh,pgi,phoEinfB,tonB)的核心片段(318bp-501bp),并进行序列分析,将测序结果提交国际数据库网站http://www.mlst.net,获得菌株的ST型。 结果 1、药敏试验：8株试验菌株对11种抗菌药物的药敏结果显示：菌株Kp1对氨苄西林、头孢唑林、庆大霉素、阿莫西林/克拉维酸耐药,对美罗培能、哌拉西林、复方磺胺甲恶唑、氨曲南、头孢哌酮、环丙沙星、头孢曲松敏感；菌株Kp2等其他7株肺炎克雷伯菌临床株的抗生素药敏谱完全相同,且均为多重耐药菌,即对氨苄西林、头孢唑林、庆大霉素、头孢哌酮、环丙沙星、头孢曲松耐药,对阿莫西林/克拉维酸、美罗培能、哌拉西林、复方磺胺甲恶唑、氨曲南敏感。6株对照菌株中：菌株Kp14对11种抗菌药物均敏感；菌株Kp9和Kp12对哌拉西林、氨苄西林、头孢哗林、庆大霉素、头孢哌酮、环丙沙星、头孢曲松、阿莫西林/克拉维酸耐药,对美罗培能、复方磺胺甲恶哗、氨曲南敏感；其它3株菌的药敏谱不尽相同。 2、PFGE结果：8株试验菌株中,共分出2型,菌株Kp2-Kp8共7株肺炎克雷伯菌临床株的PFGE谱型一致,即均具有11条电泳条带,且相应条带大小相同,为PFGE Ⅱ型；菌株Kp1具有12条电泳条带,与Kp2等其它7株有7条条带以上的差异,为PFGE I型。6株对照菌株共分出6型,其电泳条带数9-12条不等,均具有7条以上条带的差异。 3、MLST的结果：3株试验菌株中,菌株Kp4,Kp5具有一致的MLST型,即ST133(12,1,1,2,5,1,36),与菌株Kp1(10,1,1,1,9,4,12)有5个基因座不同,为不相关菌株。2株对照菌株中,菌株Kp13的ST型为ST86(9,4,2,1,1,1,27)与菌株Kp9(1,1,1,1,1,1,36)具有6个基因座的不同,为不相关菌株。这一研究结果与PFGE的研究结果一致。菌株Kpl与菌株Kp9均在MLST数据库中未查询到相应的ST型。菌株Kp1的ST型与ST23, ST548, ST793, ST808最为接近,菌株Kp9的ST型与ST15, ST132, ST326, ST655, ST709, ST748最为接近。 结论 1、经抗生素药敏试验、脉冲场凝胶电泳和多位点序列分析的分型研究,可以判定天津市某医院外科病房2010年7月16日至7月28日手术后发生的5例血流感染患者为肺炎克雷伯菌医院血流感染暴发。分离自患者A的痰和血液中的肺炎克雷伯菌(Kp2,Kp3,Kp6)与分离自患者B(Kp4),C(Kp5),D(Kp7),E(Kp8)4名患者血液中的肺炎克雷伯菌为同一克隆株,根据5名患者感染的先后顺序,可能患者A为此次医院感染暴发的感染源,通过交互感染传给B,C,D,E四名患者。分离自患者A腹腔引流液的菌株Kp1与分离自其痰(Kp2)和血液中(Kp3,Kp6)的肺炎克雷伯菌不具有同源性。菌株Kp6可能是患者A的感染未治愈或为治愈后的二次感染。 2、抗生素药敏谱分型对初步判断医院血流感染暴发有一定价值,尤其适合于基层医院,但精确性欠缺。 3、脉冲场凝胶电泳分型与多位点序列分析等分子生物学分型方法,均显示了一致的分型结果,对医院感染暴发的调查及追踪溯源有重大价值。 PFGE分型结果可靠,能较好反映流行病学相关性。MLST分型结果易于标准化,可进行不同实验室间的比较,且实验过程较简便,更具推广价值。
【关键词】：医院感染暴发 血流感染 肺炎克雷伯菌 脉冲场凝胶电泳(PFGE) 多位点序列分析(MLST) 基因分型 表型分型
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R181.3
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• 英文缩略词表13-15
• 前言15-19
• 研究现状、成果15-17
• 研究目的、方法17-19
• 一、肺炎克雷伯菌感染菌株的抗生素药敏谱分析19-27
• 1.1 对象和方法19-23
• 1.1.1 对象19-20
• 1.1.2 方法20-23
• 1.2 结果23-25
• 1.2.1 药物敏感试验23-24
• 1.2.2 药物敏感性分析24-25
• 1.3 讨论25-27
• 二、肺炎克雷伯菌感染菌株的脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型研究27-33
• 2.1 对象和方法27-30
• 1.1.1 对象27-28
• 1.1.2 方法28-30
• 2.2 结果30-31
• 2.3 讨论31-33
• 三、肺炎克雷伯菌感染菌株的多位点序列分析33-45
• 3.1 对象和方法33-36
• 3.1.1 对象33-34
• 3.1.2 方法34-36
• 3.2 结果36-43
• 3.2.1 MLST结果图36-38
• 3.2.2 MLST结果分析38-43
• 3.3 讨论43-45
• 小结45-46
• 结论46-47
• 参考文献47-52
• 发表论文和参加科研情况说明52-53
• 综述53-62
• 参考文献59-62
• 致谢62

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本文编号：494225