昆明地区无菌性脑膜炎埃可病毒9型的分子流行病学研究

发布时间：2017-07-28 15:04

  本文关键词：昆明地区无菌性脑膜炎埃可病毒9型的分子流行病学研究

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【摘要】：无菌性脑膜炎是儿童常见的重大疾病,肠道病毒是引起该疾病的重要病因。埃可病毒9型(ECHO9)是从无菌性脑炎患者检测到的最常见的肠道病毒型别,常以散发或流行的形式出现。 本研究目的是对云南昆明地区5岁以下住院无菌性脑膜炎儿童进行ECH09分子流行病学调查。收集临床病例资料和采集粪便标本,通过统计学、分子生物学和细胞培养等方法进行研究。肠道病毒型别(基因型)以及抗原变异主要由肠道病毒的VP1基因决定,因此对VP1基因分析,可确定病原体为ECHO9病毒以及其抗原变异情况。该研究对于无菌性脑膜的预防、控制和研究均具有重要意义。 本实验通过对2009-2010年收集到的510份标本中提取病毒RNA,采用RT-PCR和测序的方法分析VP1基因,借助Omiga, Mega5.05等软件进行结果分析以及利用SPSS17.0软件包对临床资料进行统计学分析处理。病毒分离严格按照WHO《脊髓灰质炎实验室手册》规定的方法进行。 临床特征分析结果表明：感染ECHO9的患者与未感染ECHO9的患者在年龄、性别的分布及症状与检查没有统计学意义,提示临床特征分析不能直接鉴别是否为ECH09感染。 序列分析结果表明：(1)ECHO9阳性检出率达到了8.82%,但相较于原型株(DM株),本次收集的样品的部分VP1区出现了核苷酸序列的变异,进化树显示A236,A238,F50与2000年云南株形成一支,其余各样品形成另外一支。(2)通过对BC-环的氨基酸比较发现：与ECHO9原型株(DM株)相比,除USA-10606, ES23-Bb-ED-07, France258066-05, IS02-ns-EW-04, GB24-Br-EA-08, E9-TS-1482-Kras-RU-2008,183-00-YN-CHN-2000,A271之外均发生了替代。 细胞培养结果表明：将45份鉴定为ECHO9的标本经过细胞培养后分离出1株ECHO9病毒株。 综上所述,患儿的临床表现与是否为ECHO9感染无明显相关性；ECHO9病毒株存在明显的地域分布性,而且同一地区也存在差异,表明可能存在不同的传播途径；序列分析结果表明ECHO9出现一定变异；对于病毒型别鉴定,PCR的灵敏度高于细胞分离。这些变化是否会影响到其免疫原性和其他功能,有待进一步研究来确定。
【关键词】：无菌性脑膜炎 埃可病毒9型 分子流行病学 VP1基因 序列分析
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R742.9;R181.3
【目录】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 英文缩写表11-12
• 第一部分 前言12-20
• 1.1 概述12-17
• 1.1.1 无菌性脑膜炎简介12
• 1.1.2 肠道病毒简介12-13
• 1.1.3 ECHO9的生物学特性13-14
• 1.1.4 ECHO9的流行病学14-15
• 1.1.5 ECHO9实验室诊断15-17
• 1.2 立题分析17-18
• 1.2.1 立题背景17
• 1.2.2 立题目的17
• 1.2.3 立题意义17-18
• 1.3 试验内容设计18-20
• 1.3.1 试验内容18-19
• 1.3.2 技术路线19-20
• 第二部分 ECHO9病毒VP1区部分核苷酸序列分析20-43
• 2.1 引言20
• 2.2 实验材料20-22
• 2.2.1 标本20-21
• 2.2.2 标本收集、储存21
• 2.2.3 实验仪器与试剂21-22
• 2.2.4 引物设计22
• 2.3 实验方法22-25
• 2.3.1 粪便标本的处理22
• 2.3.2 提取病毒RNA22-23
• 2.3.3 巢式PCR23-24
• 2.3.4 结果检测24
• 2.3.5 核苷酸序列测定24
• 2.3.6 序列分析24-25
• 2.3.7 统计学分析25
• 2.4 结果与分析25-40
• 2.4.1 一般情况25
• 2.4.2 临床症状25-26
• 2.4.3 核苷酸序列测定结果及分析26-40
• 2.5 讨论40-41
• 2.6 结论41-43
• 第三部分 病毒分离43-48
• 3.1 引言43
• 3.2 实验材料43-44
• 3.2.1 病毒株43
• 3.2.2 细胞株43
• 3.2.3 实验所需仪器及试剂43-44
• 3.3 实验方法44-45
• 3.3.1 试剂配制(见表3.1)44
• 3.3.2 接种和观察(病毒分离)44-45
• 3.4 实验结果45-47
• 3.5 讨论47
• 3.6 结论47-48
• 第四部分 结论与展望48-50
• 4.1 结论48
• 4.2 创新点48-49
• 4.3 展望49-50
• 参考文献50-55
• 文献综述：ECH09的研究进展55-64
• 参考文献61-64
• 攻读学位期间发表的文章64-65
• 致谢65

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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本文编号：584613