BMP7在异氟醚后处理对抗大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用

发布时间：2017-10-09 16:09

  本文关键词：BMP7在异氟醚后处理对抗大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用

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【摘要】：目的:大脑缺血后90 min在再灌注即刻单次吸入1 MAC或2 MAC或3 MAC的异氟醚60 min,观察是否产生脑保护作用。探讨B MP7在异氟醚后处理局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用。方法:清洁级健康S D雄性大鼠70只,2.5月龄,体重230-260 g,采用随机数字表法,将其分为5组:假手术组(S组)、单纯大脑缺血再灌注组(I/R组)、异氟醚后处理组(1 MAC ISO,ISPOC1组;2 MAC ISO,ISPOC2组;3 MAC ISO,ISPOC3组)、阻断剂+异氟醚后处理组(LDN+ISO;Noggin+ISO;SB+ISO组)、阻断剂组(LDN;Noggin;SB组)。采用大脑中动脉线栓法阻断前脑血供90min、再灌注24h制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。异氟醚后处理组于再灌注即刻经紧闭式异氟醚麻醉箱吸入不同浓度异氟醚+空气,持续60 min。S组和IR组在假手术或MCAO模型制备完成后于再灌注即刻在紧闭式麻醉箱内吸入空气。阻断剂+异氟醚后处理组分别在制备MCAO前30 min腹腔注射相应的阻断剂,余同I SPOC1组。阻断剂组分别在制备MCAO前30 min腹腔注射相应的阻断剂,余同M CAO组。所有大鼠分别在再灌注24 h后,观察大鼠神经行为学改变,用Zea Longa评分法进行神经功能缺陷评分。完成神经行为学评分后分别进行T TC染色测量大鼠脑梗死体积百分比、H E染色观察大鼠海马区的显微形态学改变、凋亡试剂盒染色检测大鼠海马CA1区细胞凋亡情况、尼氏染色观察大鼠海马区神经元内蛋白合成功能改变情况、免疫组织化学染色观察大鼠海马组织C A1区BMP7、P38MAPK蛋白表达情况、蛋白印记法观察大鼠海马组织BMP7、Smad1/5/8、P38MAPK蛋白表达的变化。所有统计分析均用SPSS17.0统计软件完成。结果:模型成功率为79.2%。与I/R组相比,再灌注24 h后,ISPOC1组和ISPOC2组均神经功能缺陷评分及脑梗死面积明显下降(P0.05),ISPOC3组神经功能缺陷评分和脑梗死面积未见明显改善(P0.05)。通过病理学观察发现:1 MAC和2 MAC异氟醚后处理能明显改善MCAO模型鼠再灌注24 h后海马组织CA1区的细胞损伤情况(P0.05),3 MAC异氟醚后处理组海马组织细胞损伤情况和I/R组相比未见明显改善(P0.05)。而在后处理前120 min给予腹腔注射BMP7抑制剂L DN-193189或Noggin,1 MAC ISPOC的保护作用明显减弱(P0.05)。再灌注24 h后,1 MAC ISPOC组海马CA1区BMP7表达明显增加(P0.05),在后处理前120 min给予腹腔注射BMP7抑制剂N oggin或P38MAPK抑制剂SB203580,CA1区BMP7表达明显下降(P0.05)。Noggin对I SPOC后海马CA1区BMP7表达的抑制明显强于LDN-193189(P0.05)。阻断BMP7信号转导,磷酸化P38MAPK表达水平上调,阻断p38MAPK信号转导,BMP7表达水平下降(P0.05)。结论:异氟醚后处理能改善大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的程度,就本研究而言,1MAC异氟醚后处理神经保护作用最强;异氟醚后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的部分保护作用是由B MP7介导的,阻断B MP7信号转导能明显减弱此种保护作用。异氟醚后处理发挥对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用的过程中,B MP7与P38MAPK信号之间存在交互作用。
【关键词】：异氟醚后处理 脑缺血再灌注 神经功能缺陷评分 脑梗死容积 尼氏小体
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R614
【目录】：

• 中文摘要5-6
• 英文摘要6-9
• 中英文缩略词对照表9-10
• 前言10-13
• 材料与方法13-23
• 1. 材料13-15
• 1.1 实验动物13
• 1.2 主要实验试剂13-14
• 1.3 主要实验仪器14-15
• 2 实验方法15-23
• 2.1 实验分组及干预措施15-16
• 2.2 大鼠大脑局灶性缺血再灌注损伤模型MCAO的制备16
• 2.3 异氟醚后处理16
• 2.4 神经功能功能缺陷评分16-17
• 2.5 化学染色脑片测定脑梗死面积17
• 2.6 实验取材17-18
• 2.7 石蜡包埋切片18
• 2.8 HE染色18
• 2.9 尼氏染色18
• 2.10 TUNEL凋亡检测18-19
• 2.11 海马组织碘化丙啶（PI）染色细胞死亡检测19
• 2.12 海马组织石蜡切片免疫组织化学染色观察CA1区P38与BMP表达变化19-20
• 2.13 蛋白印记法（Western-Blot）观察海马组织 P38 与 BMP 表达变化20-22
• 2.14 病理图像观察及分析22
• 2.15 数据统计和分析22-23
• 结果23-34
• 1. 实验MCAO模型制备结果23
• 2. 不同浓度异氟醚后处理对实验大鼠一般情况及神经功能缺陷评分的影响23-24
• 3. 不同浓度异氟醚后处理缺血再灌注损伤脑梗死灶面积测定24-25
• 4. 不同浓度异氟醚后处理脑缺血再灌注损伤后海马病理形态学变化25-27
• 5. 不同浓度异氟醚后处理组TUNEL凋亡情况27-28
• 6. 不同浓度异氟醚后处理组海马组织CA1区细胞死亡情况28-29
• 7. 不同抑制剂对异氟醚后处理脑缺血再灌注损伤大鼠脑梗塞面积的影响29-30
• 8. 不同抑制剂对异氟醚后处理脑缺血再灌注损伤大鼠神经行为学评分的影响30
• 9. 抑制剂对异氟醚后处理脑缺血再灌注损伤大鼠海马CA1区细胞凋亡的影响30-31
• 10. 免疫组织化学染色观察各不同抑制剂组海马CA1区P38与BMP7表达情况31-33
• 11.Western-Blot 观察各不同抑制剂组海马组织 P38 与 BMP7 表达情况33-34
• 讨论34-37
• 结论37-38
• 参考文献38-44
• 文献综述44-52
• 参考文献48-52
• 致谢52-53
• 作者简介53-54
• 导师评阅表54

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本文编号：1001134