丙泊酚后处理对氧糖剥夺海马神经元ADAR2-AMPAR受体GluR2通路的影响

发布时间：2017-10-10 23:00

  本文关键词：丙泊酚后处理对氧糖剥夺海马神经元ADAR2-AMPAR受体GluR2通路的影响

  更多相关文章： 丙泊酚 后处理 神经元 氧糖剥夺 腺苷脱氨酶 脑保护

【摘要】：我国现有脑卒中患者700万,年新增发病160万,约60%患者不同程度丧失劳动力,因其高致残性和致死性,给患者及社会带来沉重负担;与此同时,临床工作中围术期手术操作如颅内动脉瘤夹闭术等不可避免造成缺血再灌注损伤。作为临床麻醉医师,如何选择合理有效的麻醉药物及麻醉方法确保临床脑缺血高危患者围术期生命安全及预后,是值得慎重考虑的问题。通过长期前期研究,我们实验课题组发现,丙泊酚后处理神经保护作用通过多种机制通路发挥作用,其中兴奋性谷氨酸受体α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionic acid,AMPA)受体GluR2亚基在神经突触后膜发生膜转位是其重要相关机制之一,然而如何调控AMPA受体GluR2亚基的上游机制却并非完全清楚。因此,本研究旨在通过建立离体海马神经元氧糖剥夺模型,探讨作用于RNA的腺苷脱氨酶2(adenosine deaminase acting on RNA2,ADAR2)-AMPA受体GluR2信号通路在丙泊酚后处理脑保护作用中的调控机制。实验主要分为两部分:第一部分,培养大鼠原代海马神经元并构建离体海马神经元氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)模型。第二部分,探讨ADAR2-AMPA受体GluR2信号通路在丙泊酚后处理神经保护作用中的作用。课题组通过采用随机数字表格法将原代培养海马神经元依次分为四组(n=6):正常随机对照组(Con组),氧糖剥夺组(OGD组),氧糖剥夺+丙泊酚后处理组(Pro组),ADAR2 siRNA干扰组+氧糖剥夺+丙泊酚后处理组(siADAR2组)。24小时后采用普通光镜照相观察神经元细胞形态,分别运用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法和3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)法检测原代培养海马神经元细胞凋亡率和细胞存活率,蛋白免疫技术(Western Blot,WB)方法检测AMPA受体GluR2亚单位和ADAR2核蛋白编辑酶蛋白表达,巢式逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)和特异性限制性内切酶BbV1方法检测AMPA受体GluR2亚单位mRNA Q/R位点编辑比例,采用细胞流式检测技术检测原代培养海马神经元细胞内钙离子浓度变化。实验结果表明:第一部分,原代培养神经细胞免疫荧光染色结果显示,原代培养细胞中绝大部分细胞为微管结合蛋白(microtubule associated protein,MAP2)标记阳性的神经元细胞,神经元细胞培养纯度达到95%以上(P0.05),符合实验条件,可以继续用于下一步实验研究;MTT实验结果显示,与随机对照组相比,氧糖剥夺1h、2h和4h发生时原代培养海马神经元细胞吸光度值下降明显并具有统计学差异(P0.05),提示原代海马神经元氧糖剥夺模型构建成功,同时实验数据发现氧糖剥夺1h时原代培养海马神经元细胞吸光度值为正常对照组组52%左右,因此选择1h作为原代海马神经元细胞氧糖剥夺处理时间。第二部分,与正常对照组相比,O组和Pro组原代培养海马神经元细胞细胞凋亡率增加,细胞存活率下降,AMPA受体GluR2亚单位mRNA Q/R位点编辑比例下降,ADAR2蛋白核转位降低,神经元细胞内钙离子浓度变化显著增加(P0.05);与OGD组相比,Pro组原代培养海马神经元细胞细胞凋亡率降低,细胞存活率增加,AMPA受体GluR2亚单位mRNA Q/R位点编辑比例提高,ADAR2蛋白发生核转位并比例增加,神经元细胞内钙离子浓度变化显著降低(P0.05);以上作用均可被ADAR2 siRNA部分阻断。因此,丙泊酚后处理对原代培养的氧糖剥夺海马神经元具有急性脑保护作用,其神经保护机制可能与提高原代培养的氧糖剥夺海马神经元ADAR2蛋白核转位,促进AMPA受体GluR2亚单位mRNA Q/R位点转录后编辑比例增加,从而稳定神经元突触后膜GluR2亚单位膜转位有关。
【关键词】：丙泊酚 后处理 神经元 氧糖剥夺 腺苷脱氨酶 脑保护
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R614
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-14
• 研究现状、成果11-12
• 研究目的、方法12-14
• 对象和方法14-32
• 对象14
• 材料14-17
• 方法17-32
• 结果32-40
• 讨论40-49
• 结论49-50
• 创新点50-51
• 参考文献51-57
• 发表论文和参加科研情况说明57-58
• 综述58-67
• 综述参考文献65-67
• 致谢67

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 翁默;海马神经元的集群放电活动与关联性学习过程的实时对应[J];生理科学进展;2004年01期

2 ;我校基础部章卫平课题组发现调控海马神经元发育的新机制[J];第二军医大学学报;2010年04期

3 朱辉;;新生海马神经元的功能与成熟神经元相同[J];国外医学情报;2003年12期

4 李林芳;张永健;吴洋;苗庆峰;胡会青;孟静;;双苯氟嗪对铅致海马神经元损伤的保护作用[J];中国公共卫生;2006年11期

5 陈志勇;王玲;潘振伟;孙丽华;张高小;潘国聘;吕延杰;杨宝峰;;三氧化二砷对海马神经元细胞内钙离子浓度的影响[J];哈尔滨医科大学学报;2007年01期

6 秦锦标;周红;郑秀琴;;氟西汀对海马神经元生长的影响[J];现代医学;2007年04期

7 苗庆峰;张伟;薛健梅;陈雪彦;张永健;;Aβ_(25～35)对海马神经元的损伤及双苯氟嗪的保护作用[J];中国老年学杂志;2008年22期

8 汤欣;陈益人;周松林;丁斐;;神经再生素促大鼠海马神经元生长的研究[J];解剖学报;2008年01期

9 吴洋;张永健;苗庆峰;薛健梅;高霄飞;;双苯氟嗪对谷氨酸致海马神经元损伤的保护作用[J];宁夏医科大学学报;2009年01期

10 鄂晓;姜爽;张英鸽;;海马神经元之间膜性连接的初步研究[J];军事医学科学院院刊;2010年05期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 刘蓓蓓;潘昊;陈娣;谢学猛;杨光田;;外源性硫化氢对大鼠海马神经元氧糖缺失/恢复损伤的作用[A];中华医学会急诊医学分会第十六次全国急诊医学学术年会论文集[C];2013年

2 周敏;崔越;周静文;黄子芮;谢远龙;;海马神经元钙离子通道的研究进展[A];2011全国老年痴呆与衰老相关疾病学术会议第三届山东省神经内科医师（学术）论坛论文汇编[C];2011年

3 刘卫;郭华;郑建全;刘振伟;刘传缋;;苯环壬酯对烟碱诱发海马神经元兴奋性突触后电流的抑制作用[A];中国药理学会第八次全国代表大会暨全国药理学术会议论文摘要汇编[C];2002年

4 刘卫;郭华;郑建全;刘振伟;刘传缋;;苯环壬酯对烟碱诱发海马神经元兴奋性突触后电流的抑制作用[A];中国药理学会第八次全国代表大会论文摘要集（第二部分）[C];2002年

5 蒋霞;朱传凤;江雅新;孙岚;张英鸽;;海马神经元的原子力显微成像[A];全国第七届扫描隧道显微学学术会议（STM'7）论文集（一）[C];2002年

6 叶伟;裘燕;刘富鑫;钟伟霞;罗建红;;咪唑安定对小鼠海马神经元放电模式的影响[A];Proceedings of the 8th Biennial Conference of the Chinese Society for Neuroscience[C];2009年

7 石素琴;蔡志平;霍东升;石岩;贾建新;;海马神经元的扫描电镜观察[A];科技创新与经济结构调整——第七届内蒙古自治区自然科学学术年会优秀论文集[C];2012年

8 蔡志平;霍东升;石素琴;李朝晖;贾建新;方刚;张明;;新生大鼠海马神经元的体外培养[A];科技创新与经济结构调整——第七届内蒙古自治区自然科学学术年会优秀论文集[C];2012年

9 张明;蒋莉;郭艺;;大鼠海马神经元无血清原代培养及膜电位测定[A];中华医学会第十四次全国儿科学术会议论文汇编[C];2006年

10 胡祁生;陈静芳;王勇;汤剑青;万曙霞;魏劲波;;川芎嗪对海马神经元电活动的调制作用[A];中国生理学会第21届全国代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2002年

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 ;海马神经元损伤及保护的纳米级三维构像变化研究[N];中国医药报;2003年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 张玮;大鼠脑缺血—再灌注损伤时SGK1信号途径在海马神经元保护的机制研究[D];昆明医科大学;2015年

2 张静;氧糖剥夺后海马神经元中AP4M1表达变化及其对AMPA受体运输的调控作用[D];郑州大学;2014年

3 芮妍芳;β-淀粉样蛋白对海马神经元的急性损伤及其机理研究[D];清华大学;2006年

4 沈逸;白细胞介素-2对离子型谷氨酸受体功能以及培养海马神经元树突发育、突触发生的影响[D];浙江大学;2008年

5 姚健;高气压对海马神经元和胶质细胞的影响及其机制[D];第二军医大学;2002年

6 吴蓓;海马神经元中的突触发育机制[D];中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）;2006年

7 秦海宏;原代培养海马神经元锌内稳态研究[D];第二军医大学;2004年

8 马夫翠;17β-群勃龙对大鼠海马神经元的影响及其作用机制研究[D];山东师范大学;2014年

9 徐建义;血管内皮生长因子对大鼠海马神经元离子通道功能的调节及其机制分析[D];复旦大学;2001年

10 赵以林;异氟烷对发育期大鼠海马神经元电生理及兴奋性神经毒性的影响[D];华中科技大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 张馥镇;丙泊酚及右美托咪定对体外培养海马神经元的影响及机制研究[D];河北医科大学;2015年

2 李敏;胆红素致大鼠大脑皮质和海马神经元毒性损害的比较研究[D];兰州大学;2015年

3 高延伦;线粒体Rho蛋白1对无镁致痫大鼠海马神经元的作用及其机制研究[D];郑州大学;2015年

4 马宁田;枸杞多糖对海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤的保护作用及对TLR4/NF-κB信号通路的影响[D];宁夏医科大学;2015年

5 李明;外源性CCK-8对甲基苯丙胺诱导小鼠记忆及海马神经元损伤的影响[D];河北医科大学;2015年

6 成伟;脑神康胶囊对高糖乏氧环境下大鼠海马神经元氧化应激损伤的保护作用[D];山东大学;2015年

7 盛蕾;纳米氧化钛引起海马神经元毒性的分子机制研究[D];苏州大学;2015年

8 刘靓靓;槲皮素对大鼠海马神经元的雌激素样保护作用及其机制研究[D];河北北方学院;2015年

9 曾洋;Ⅰ组mGluR在氟砷联合染毒致海马神经元突触可塑性损伤中的调控作用[D];华北理工大学;2015年

10 赵敏;海马神经元TLR4介导的PTEN/PI3K/AKT/NF-κB信号通路在神经炎症中的作用[D];南通大学;2014年

，

本文编号：1009057