微小RNA-214对脓毒症小鼠心肌损伤的作用

发布时间：2017-10-16 18:24

  本文关键词：微小RNA-214对脓毒症小鼠心肌损伤的作用

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【摘要】：目的:脓毒症的高发病率及病死率使其成为严峻的世界性医学问题。脓毒症由病原微生物感染诱发全身炎症反应,继而发生渐进器官功能障碍,其中以心血管系统为著。研究表明,约有40%-50%的脓毒症患者具有心肌损伤,其病死率高达70%-90%,而不具有心肌损伤的病死率率远远减低,为20%。尽管已经对其诊断和治疗方法进行了大量研究,但对其有效治疗仍具有挑战性。因此,为减少脓毒症患者的发病率和病死率,对治疗心肌损伤为目标的新的治疗策略有迫切的需求。迄今为止,多种微小RNA(mi RNA)已被证实在脓毒症中表达异常,对其诊断及预后提供参考价值。而且研究证实,mi RNA与多种心脏疾病相关,其中,mi RNA-21在缺血性心脏病中保护心脏功能扮演着重要角色,mi RNA-494对缺血再灌注心肌损伤也具有保护作用,mi RNA-214,已被证实可保护氧化应激诱导的心肌细胞损伤。然而目前对mi RNA-214与脓毒症诱导的心肌损伤是否相关还不清楚。由于心肌损伤是脓毒症死亡的主要原因,因此我们应着眼于确定mi RNA-214表达与脓毒症诱导的心肌损伤是否相关及对其作用。方法:1采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备小鼠脓毒症模型,随机分为6组:假手术组、CLP组、mi RNA-214前体空白对照组、mi RNA-214抑制剂空白对照组、mi RNA-214前体组、mi RNA-214抑制剂组,分别于术后6 h、12 h、24 h采用实时荧光定量聚合酶链反应法(RT-PCR)检测假手术组和CLP组心肌组织mi RNA-214表达情况,观察术后24 h假手术组和CLP组心肌组织病理改变确定模型建立成功,并选定术后12 h采用RT-PCR法检测各组心肌组织mi RNA-214表达情况。2采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备小鼠脓毒症模型,随机分为4组:假手术组、CLP组、mi RNA-214前体+CLP组、mi RNA-214抑制剂+CLP组,分别于术后12 h、24 h采用酶联免疫法(ELISA)测定各组心肌组织上清液肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)水平及血清肌钙蛋白(c Tn I)、脑钠肽(BNP)水平,于术后24 h采用流式细胞技术测定心肌细胞凋亡率,光镜下观察心肌组织病理学结果。结果:1 CLP对小鼠一般状况及病理改变的影响假手术组及CLP组小鼠于麻醉手术后3-6 h清醒,假手术组小鼠均可正常饮水、进食,CLP组小鼠清醒后精神萎靡,反应差,活动少,竖毛,寒战,不饮水,食欲低下,眼角分泌物增多,随时间延长病态逐渐明显;假手术组中小鼠心肌组织未见明显病理改变,CLP组中心肌细胞可见空泡变性,心肌坏死,心肌纤维肿胀,间质水肿。2 mi RNA-214在CLP小鼠心肌组织中的表达上调与假手术组比较,CLP组mi RNA-214的表达水平上调;CLP术后6 h、12 h、24 h mi RNA-214表达分别是对应时相假手术组mi R-214表达的2.28倍、1.89倍、1.53倍(P均0.05)。说明脓毒症时伴有mi RNA-214异常表达。3 mi RNA-214转染情况与CLP组术后12 h比较,转染mi RNA-214前体后mi RNA-214表达是CLP组mi RNA-214表达的1.86倍,而转染mi RNA-214抑制剂后mi R-214表达则是CLP组的15.5%(P0.05);mi RNA-214对照组mi RNA-214表达与及假手术组无统计学差异(P0.05)。说明mi RNA-214转染成功,且转染本身对mi RNA-214表达无影响。4 mi RNA-214对脓毒症诱导的心肌损伤具有保护作用转染mi RNA-214前体的CLP小鼠与CLP组小鼠相比,心肌组织上清液中促炎因子水平降低,抗炎因子水平升高,心肌损伤标记物c Tn I水平降低,心衰指标BNP水平降低,心肌细胞凋亡率降低,心肌组织形态学结果也显示病理改变减轻;而转染抑制剂组的CLP小鼠心肌组织上清液中促炎因子水平升高,抗炎因子水平降低,心肌损伤标记物c Tn I水平升高,心衰指标BNP水平升高,心肌细胞凋亡率升高,心肌组织形态学结果也显示病理改变较CLP组加重,提示mi RNA-214对脓毒症诱导的心肌损伤具有保护作用。结论:1 CLP对小鼠一般状况及心肌组织形态学均有影响,提示应用CLP建立脓毒症心肌损伤模型成功。2脓毒症诱导的心肌损伤中mi RNA-214表达异常,在脓毒症诱导的受损心肌中mi RNA-214表达增加。3 mi RNA-214对脓毒症诱导的心肌损伤具有保护作用。过表达mi RNA-214可降低促炎因子、心肌酶水平、心肌细胞凋亡率,减轻病理改变,进而改善心脏的收缩及舒张功能,低表达mi R-214则会使脓毒症小鼠心脏功能进一步恶化。
【关键词】：微小RNA-214 脓毒症 心肌损伤 炎症因子 心肌酶 凋亡
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R459.7
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文缩写10-11
• 前言11
• 材料与方法11-18
• 结果18-21
• 附图21-24
• 附表24-26
• 讨论26-31
• 结论31-32
• 参考文献32-36
• 综述 微小RNA在脓毒症临床实践中的应用36-43
• 参考文献40-43
• 致谢43-44
• 个人简历44

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本文编号：1044225