IL-27在博来霉素诱导小鼠肺纤维化模型中对T淋巴细胞的分化及相关因子影响作用的实验研究

发布时间：2017-11-05 07:01

  本文关键词：IL-27在博来霉素诱导小鼠肺纤维化模型中对T淋巴细胞的分化及相关因子影响作用的实验研究

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【摘要】：目的：本研究通过给予小鼠体内注射白介素27重组蛋白(rmIL-27)和白介素27抗体重组蛋白(Anti IL-27),初步探讨博来霉素诱导肺纤维化模型中IL-27对T淋巴细胞分化及相关因子的影响。方法：1、将120只6-8周龄18-22GC57BL/6小鼠随机分为正常组(A组)、BLM模型组(B组)、BLM+IL-27组(C组)、BLM+抗IL-27组(D组),每组各30只。2、麻醉小鼠后A组给予气管注入生理盐水0.05m1,B、C、D组小鼠气管内注入生理盐水稀释的博来霉素溶液0.05ml (5ml/kg)。C组造模后第二天开始腹腔皮下注射小鼠IL-27重组蛋白液1μg/只.天,连续注射7天,D组造模后当天一次性腹腔皮下注射小鼠抗IL-27蛋白溶液200mg／只。3、分别于第3天,第7天,第14天,第28天处死BLM组(B组)小鼠各5只,流式细胞术检测肺组织中与IL-27双染的T淋巴细胞,B淋巴细胞、自杀伤性细胞、树突状细胞以及巨噬细胞的细胞比例,观察博来霉素所致肺纤维化中IL-27的来源。4、分别于第7天,第28天处死各组小鼠5只,①Western Blotting检测IL-27在4组肺组织中的表达,观察各组区别；②流式细胞术检测脾脏组织Th1、Th2、Th17以及Treg细胞比例；③酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺泡灌洗液中不同Th细胞亚群相关细胞因子浓度。观察IL-27在肺纤维化中对T淋巴细胞分化及相关因子的影响。结果：1、3、7、14、28天与IL-27双染的肺组织中的T淋巴细胞在所占细胞比例分别为32.51±7.37%、39.98±4.19%、70.7±0.54%、43.82±2.28%；B淋巴细胞所占细胞比例分别为0.03±0.05%、0.07±0.09%、4.35±0.46%、7.66±0.91%：树突状细胞所占细胞比例分别为4.54±0.71%、15.96±0.84%、20.97±0.81%、16.13±1.15%；自然杀伤细胞所占细胞比例分别为0.58±0.3%、6.63±0.55%、26.69±0.82%、0.48±0.49%；巨噬细胞所占细胞比例分别为0.31±0.08%、1.12±0.51%、21.97±0.93%、8.69±0.2%,T淋巴细胞在各时间点所占细胞比例最高(P0.05)。2、第28天各组T淋巴细胞亚群比例变化：Thl细胞比例C组(0.93±0.04%)最大,A组(0.32±0.01)其次,B组(0.15±0.01)次之、D组(0.04±0.01)最小(P0.05)；Treg细胞比例C(9.23±0.85%)组大于A(2.57±0.39%)、B(0.77±0.11%)、D(0.59±0.05%)组(P0.05)：Th2细胞比例D组(3.8±0.28%)大于A(0.12±0.04%)、B(1.34±0.22%)、C(0.38±0.16%)组(P0.05)；B组大于C组(P0.05)；Th17细胞比例D组(0.94±0.16%)大于A(0.13±0.07%)、B(0.54±0.08%)、C(0.38±0.07%)组(P0.05)：B组大于C组,细胞比例无差异(P0.05)。3、肺泡灌洗液中各细胞因子浓度变化：第7、28天IFN-γ细胞因子水平C组(49.67±3.06 pg/ml)、(54.11±7.03pg/ml)高于A组(37.1±4.51 pg/ml)、(42.98±2.87pg/ml)高于B组(20.79±8.45 pg/ml)、(16.01±2.98pg/ml),C组高于D组(17.01±4.63pg/ml)、(13.85±2.49pg/ml)(P0.05)；IL-4细胞因子浓度B组(47.7±3.06pg/ml)、(67.87±16.65pg/ml)高于C组(28.28±4.62pg/ml)、(38.48±5.73pg/ml)高于A组(4.98±2.Olpg/ml)、(6.99±1.07 pg/ml),D组(60.81±5.68pg/ml)、(71.41±2.371.41±2.3pg/ml)高于C组(P0.05)；IL-10细胞因子浓度B组(156.57±54.71pg/ml)、(243.8±58.29pg/ml)D组(226.65±31.87pg/ml)、(265.97±72.71pg/ml)较A组(89.59±53.01pg/ml)、(120.28±32.73pg/ml)显著升高,C组(129.43±30.13pg/ml)、(166.2±45.77pg/ml)均低于D组,差异具有统计学意义(P0.05)；B组高于C组(P0.05)；IL-17细胞因子浓度B组(51.23±5.78pg/ml)、(56.05±0.42pg/ml)D组(60.31±19.69pg/ml)、(73.03±18.4pg/ml)高于A(30.93±4.78pg/ml)、(32.53±3.05pg/ml)组,D组高于C组(42.59±14.84pg/ml)、(31.82±6.48pg/ml)(P0.05)；TGFβ1细胞因子浓度具第7天、28天D组(432.76±59.22pg/ml)、(1025.28±175.33pg/ml)大于B组(334.67±65.83g/ml)、(489.72±104.82pg/ml)大于A组(168.29±37.61pg/ml)、(177.6±33.34pg/ml),D组高于C组(255.5±102.05pg/ml)、(232.76±67.8pg/ml)(P0.05)；28天C组(232.76±67.8pg/ml)细胞因子水平低于B组(489.72±104.82pg/ml)(P0.05)；第7天A组(168.91±42.5pg/ml)IL-6细胞因子浓度小于B(212.68±73.88pg/ml)、D(273.43±118.05pg/ml)组,B、C、D各组间细胞因子水平无差异(P0.05)；第28天IL-6细胞因子浓度B组(503.47±90.13pg/ml)、D组(816.43±118.98pg/ml)高于A组(197.12±27.45pg/ml),B组(503.47±90.131pg/ml)高于C组(275.12±36.62pg/ml),D组高于C组(P0.05)。结论：1、IL-27在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化模型中主要来源于T淋巴细胞。2、IL-27在博来霉素所诱导的小鼠肺纤维化模型中,促进T淋巴细胞向Th1、Treg细胞分化,而抑制其细胞亚群Th2、Th17细胞的产生。3、IL-27在博来霉素所诱导的小鼠肺纤维化模型中,促进T淋巴细胞相关细胞因子IFN-γ分泌,抑制IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、TGF-β 1分泌,以及IL-27可能通过抑制TGF-β1信号通路,对肺纤维化起保护作用。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R563

【参考文献】

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1 李敬萍;关键;许西琳;罗倩;王蓓;;IL-27在结核性胸膜炎胸水中的表达及其意义[J];吉林医学;2013年19期

2 李丽娜;王华;周蕾;张永胜;于永利;王丽颖;孙陆果;;博莱霉素诱导小鼠肺间质纤维化造模方式的选择[J];中国免疫学杂志;2010年03期

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本文编号：1143075