益气养阴化痰祛瘀方对2型糖尿病大鼠胰岛β细胞的保护作用及机制

发布时间：2017-11-05 16:19

  本文关键词：益气养阴化痰祛瘀方对2型糖尿病大鼠胰岛β细胞的保护作用及机制

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【摘要】：本文基于2型糖尿病的中医药辨治经验和前期对2型糖尿病大鼠病证结合模型的研究,选用高脂高糖饲料喂养5周后一次性腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)的方法诱导出T2DM大鼠模型,对成模后第5-6周阶段(中医气阴两虚兼痰瘀证)大鼠的病生理和中医证候的特点进行探查,侧重于从胰岛损伤和保护的角度,探讨中医益气养阴化痰祛瘀方对模型大鼠胰岛的作用及机制。论文分为文献综述和实验研究两部分。文献综述包括中医药防治2型糖尿病的研究进展和2型糖尿病胰岛及p细胞损伤的研究进展。实验部分包括中、西医对2型糖尿病大鼠模型特点的研究和益气养阴化痰祛瘀方对2型糖尿病大鼠模型胰岛的防治作用及机制探讨。方法：健康雄性SD大鼠55只,体重190±10g,适应性喂养1w后,按体重随机分为正常组10只和造模组45只,其中正常组大鼠给予基础饲料喂养,造模组按高脂高糖饲料喂养5周后加一次性小剂量链脲佐菌素(1%STZ溶液30mg/kg)腹腔注射的方法建立T2DM大鼠模型,注射STZ后第三天,尾静脉采血检测大鼠空腹血糖,选择注射STZ的空腹血糖≥11.1mmol/L的30只大鼠,并随机分为模型对照组、西药治疗组、中药干预组,每组10只。正常组大鼠继续给予基础饲料,其它各组大鼠继续给予高脂高糖饲料喂养。实验11w开始,中药干预组和西药治疗组分别给予益气养阴化痰祛瘀方(4.80g/kg/d)和盐酸吡格列酮(135mg/kg/ d)灌胃,正常组和模型组分别给予等量蒸馏水,连续灌胃2w。实验期间观测并记录各组大鼠的毛发色泽、行为状态、饮食、饮水及尿量等外观行为方面的变化,每周称重1次；实验第12周末各组动物在乙醚麻醉下腹主动脉取血,分离取出胰脏。电化学发光法测定血清胰岛素(Fins),血糖仪测定空腹血糖(FPG),计算胰岛素敏感指数(IAI)、胰岛素抵抗指数(IRI)；生化法测定血清甘油三脂(TG)血清高密度脂蛋白(HDL-c)、血清低密度脂蛋白(LDL-c)、血浆游离脂肪酸(FFA)胰腺组织iNOS；酶联免疫法测定血清6-酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)、血栓素B2(TXB2)、血管紧张素Ⅱ (AngⅡ)、胰岛素原(PI)、胰淀素(Amylin),胰腺组织内皮细胞生长因子(VECF)、肝细胞生长因子(HGF)、信号传导因子(JAK-2、PKB);胰腺组织病理切片分别采用HE染色、醛复红染色、D-PAS染色和Mallory染色进行胰岛的观察。结果：(1)模型大鼠的病证特点。较之于正常组,模型组大鼠①外部表征：在实验第11-12周出现行动迟缓,喜弓背扎堆,精神萎靡,毛发油腻,尾部潮湿有瘀斑；饮食量、饮水量、小便量均显著增加,体重明显减轻(P0.01)；②糖、脂代谢方面：模型大鼠血清FPG、Fins、IRI显著升高,IAI显著降低(P0.01)；血清TG、LDH-c和FFA显著性升高,HDL-c降低(P0.05或P0.01)；③胰岛功能方面：模型大鼠血清PI、胰脏内胰淀素含量显著升高(P0.01)；④血液及血管调节因子：模型大鼠血清6-keto-PGF1a显著降低,TXB2、TXB2/6-keto-PGF1a、AngⅡ显著升高(P0.05或P0.01)。⑤胰腺组织：胰脏iNOS显著升高,VEGF、HGF、JAK2、PKB含量均显著下降(P0.05或P0.01)；镜下的胰岛明显萎缩呈不规则形、结构紊乱,胰岛细胞出现空泡样变、β细胞面积明显减少,胰岛内的微血管基底膜增厚,胶原纤维明显增多。(2)中医益气养阴化痰祛瘀方对模型大鼠的作用。较之于模型组,①外部表征：西药组大鼠的活动较缓、眯眼、反应较为迟钝、毛发光泽有减、臀尾潮湿及有瘀点、饮水量和小便量显著减少、体重显著增加(P0.01)；中药组大鼠的活动增加,反应较灵敏、毛发较光顺、尾部潮湿不显、尾部瘀点减少、饮食量、饮水量及小便量显著减少、体重显著增加(P0.01或P0.05)；与西药组比较,中药组大鼠饮水量呈显著性减少(P0.01)。②糖、脂肪代谢方面：中药组和西药组的大鼠FPG、Fins、I RI均显著降低,IAI显著升高(P0.01)；血清TG下降、HDL-c下降(P0.05或P0.01)HDL-c和FFA分别有升高和下降趋势(P0.05)；西药组与中药组二组间均无明显差异(P0.05)；③胰岛功能方面：西药组和中药组大鼠血清PI、胰脏胰淀素含量均显著下降(P0.01),西药组与中药组二组间无明显差异(P0.05)。④血液及血管调节：西药组和中药组大鼠6-keto-PGF1a显著升高、TXB2、TXB2/6-keto-PGF1a、Ang Ⅱ均显著降低(P0.01)；西药组与中药组二组间无明显差异(P0.05)。⑤胰腺组织：西药组大鼠胰腺iNOS显著下降(P0.01), VEGF、HGF、JAK2、PKB含量无明显变化(P0.05),镜下的胰岛结构比较规整,胰岛出现萎缩,少量细胞呈空泡化,β细胞平均面积有所增加,胰岛内微血管基底膜部分增厚,胶原纤维减少；中药组大鼠胰腺iNOS显著下降(P0.01), VEGF、HGF、JAK2、PKB显著升高(P0.05或P0.01),其中VEGF、HGF、JAK2较西药组显著升高(P0.01)；镜下胰岛结构较清晰,细胞形态较好,胰岛空泡样变明显减少,β细胞平均面积明显增加,胰岛内微血管基底膜增厚不明显,胶原纤维明显减少,其中胰岛β细胞面积较西药组明显增加(P0.01)结论：高脂高糖饲料喂养5周后一次性腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)的方法成功诱导出T2DM大鼠模型,大鼠成模后第5-6周阶段不仅表现出中医消渴病的典型特征,同时还具有气阴两虚兼痰瘀证的证候特点；该模型不仅具有西医2型糖尿病IR特点,还伴有血管调节的障碍、胰脏微环境异常及胰岛β细胞的损伤。中医益气养阴化痰祛瘀方作用此阶段的2型糖尿病模型大鼠2周后,不仅可以改善模型大鼠的中医证候,而且还能改善模型大鼠的糖脂代谢紊乱、胰脏微环境及胰岛β细胞的损伤；其效用机制除了降糖、降脂作用外,可能还涉及调节血管活性因子、改善胰脏胰岛微环境及促进β细胞修复等多个环节。盐酸吡格列酮具有明显改善模型大鼠的糖脂代谢紊乱及抗IR作用,减轻胰岛纤维化,但对胰岛微血管病变及p细胞的增生修复并无明显改善作用。相比而言,中药复方的多向调节作用在防治2型糖尿病中具有一定优势。
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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本文编号：1144949