夏荔芪胶囊对大鼠良性前列腺增生的疗效及初步机制探讨

发布时间：2017-11-07 11:07

  本文关键词：夏荔芪胶囊对大鼠良性前列腺增生的疗效及初步机制探讨

  更多相关文章： 良性前列腺增生 下尿路症状 夏荔芪胶囊 增殖细胞核抗原 双氢睾酮 生长因子

【摘要】：研究背景良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia, BPH)是中老年男性常见泌尿男科疾病,流行病学资料显示,BPH随年龄增加发病率逐渐上升,在50、60及80岁以上老年男性发病率分别为50%、70%和92%,其中半数左右患者因膀胱出口梗阻导致下尿路症状、急性尿潴留、反复泌尿系感染、肾功能损害等而需要临床干预。BPH病因学研究是目前BPH防治研究的中心,同时也是泌尿男科学及老年病学研究热点之一,但具体的病理生理学机制尚未完全阐明。目前认为年龄增长和有功能的睾丸是BPH的主要发病基础,同时也是BPH的必备条件。近年来研究认为,代谢机制紊乱、激素紊乱及慢性炎症与BPH的发生发展密切相关。目前,药物干预已成为防治BPH的一个重要手段,其主要通过调节雌雄激素、改善下尿路症状、改善微循环和增强免疫功能而发挥作用。中药由于其安全性较好、不良反应小、疗效确切、适合长期服用等特点,在BPH治疗方面具有一定的优势,有着良好的发展前景。BPH在中医属“癃闭”、“精浊”、“淋证”范畴。中医辩证分析该病病因复杂,主要为湿热蕴结、肺热气壅、脾气不升、肾元亏虚、肝郁气滞等。夏荔芪胶囊以补气、活血、祛湿为组方原则,具有健脾益肾、利水散结的功效,适于临床脾肾气虚兼痰瘀证的BPH患者。在现代生物医学研究中,采用动物疾病模型,进行药物干预试验已成为重要手段,有助于方便有效地认识人类疾病发展规律,从而有利于制定相应的防治措施。本课题旨在通过建立雄激素诱导的BPH大鼠模型,同时使用夏荔芪胶囊进行实验干预,观察夏荔芪胶囊对实验性大鼠前列腺增生的抑制作用,并从生殖激素、细胞增殖／凋亡相关蛋白、生长因子、氧化应激损伤、炎症因子的平衡方面初步探讨其作用机制,为夏荔芪胶囊的临床应用提供实验依据。目的1、通过对去势后SD大鼠皮下注射丙酸睾酮建立BPH模型,使用夏荔芪胶囊进行干预并探讨其对BPH大鼠前列腺组织形态学的影响；2、探讨夏荔芪胶囊对BPH大鼠血清及前列腺组织双氢睾酮(DHT)含量的影响；3、研究夏荔芪胶囊对BPH大鼠前列腺组织中增殖细胞核抗原(PCNA).半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶一3(caspase-3)表达水平的影响；4、探究夏荔芪胶囊对BPH大鼠前列腺组织中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达水平的影响；5、探索夏荔芪胶囊对BPH大鼠血清及前列腺组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影响；6、研究夏荔芪胶囊对BPH大鼠血清及前列腺组织白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子.α(TNF-α)表达水平的影响；7、通过以上研究,观察夏荔芪胶囊治疗大鼠BPH模型的疗效,并初步探讨其作用机制,为临床上治疗BPH奠定实验基础及提供理论依据。方法将雄性SD大鼠随机分为5组,每组10只。A组：空白对照组(假手术组)；B组：模型对照组；C组：夏荔芪胶囊高剂量组(1.20 g/kg·d,30d)；D组：夏荔芪胶囊低剂量组(0.61 g/kg·d,30 d);E组：阳性对照组(非那雄胺0.8 mg/kg·d,30 d)。将SD大鼠称重后,麻醉下无菌切除双侧睾丸,A组行假手术。术后第8d开始皮下注射丙酸睾酮5 mg/kg·d,连续30 d,A组皮下注射等体积生理盐水。造模期间常规饲养,1个月后麻醉下行前列腺组织活检以确认造模成功,按前述方法连续用药1个月。每组于末次给药后称重,麻醉后取血,切开腹部,观察前列腺组织外观及周围粘连情况,完整剥离前列腺,用滤纸吸干后称重。取部分前列腺组织,用10%甲醛溶液固定后制备前列腺病理组织切片,HE染色后镜下观察前列腺组织病理变化情况；使用免疫组化及免疫荧光法检测各组大鼠前列腺组织PCNA、caspase-3及bFGF的表达情况；使用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测各组大鼠血清及前列腺组织中SOD、MDA、DHT、IL-8、TNF-α的表达水平。使用SPSS 20.0软件进行数据分析,计量资料以x±SD表示,经正态性检验和方差齐性检验后,方差齐者组间总体比较使用单因素方差分析(One-Way ANOVA),方差不齐则进行秩和检验；有差异者进一步采用最小显著差异法(LSD-t)做两两比较。P0.05为差异有统计学意义。结果1、各组大鼠前列腺湿重及前列腺指数改变情况与空白组相比,模型组的前列腺湿重明显增加[(1326.15±60.20)mg vs.(471.38±17.96)mg,P0.01]；而夏荔芪高、低治疗组[(914.33±36.08)mg；(1099.76±46.28)mg]及阳性药物对照组[(817.25±53.99)mg]的前列腺湿重较模型组则明显降低(P0.01)；且夏荔芪高剂量组较夏荔芪低剂量组的前列腺湿重降低更明显(P0.01),而各治疗组中阳性对照组前列腺湿重降低最明显。与空白组相比,模型组的前列腺指数明显增加[(1.06±0.06)vs.(2.89±0.18),P0.01]；而与模型组相比,夏荔芪高、低治疗组(2.02±0.08；2.39±0.11)及阳性药物对照组(1.83±0.10)的前列腺指数则明显降低(P0.01)；且夏荔芪高剂量组较夏荔芪低剂量组的前列腺指数下降更显著(P0.01),而各治疗组中阳性对照组前列腺指数下降最显著。2、各组大鼠前列腺组织大体情况及病理组织学改变肉眼观察,空白组大鼠前列腺色泽淡红、腺体组织质软,有弹性,表面光滑无结节,与周围其他组织无粘连,容易分离。模型组大鼠前列腺体积增大,色泽暗红,欠光泽,质地较韧,弹性差,局部与周围组织无粘连,易剥离。夏荔芪治疗组前列腺腺体质地较柔软,有弹性,有光泽,无局部结节,与周围组织无粘连,以高剂量组改善更明显；阳性药物对照组前列腺腺体与周围组织无粘连,偶可触及结节,弹性稍差。HE染色光镜下结果显示,空白组大鼠前列腺组织结构完整,腺上皮细胞排列整齐,腺腔内可见较多染色为粉红色的分泌物,间质未见水肿,有少量纤维组织,偶见极少量炎性细胞浸润；模型组大鼠前列腺腺腔狭窄,部分腺腔闭塞,腺上皮细胞有不同程度增生,腺腔内有少量分泌物,间质内可见大量纤维结缔组织增生,腺泡腔内及组织间隙内可见少量炎性细胞浸润；各夏荔芪治疗组及阳性药物治疗组大鼠前列腺腺腔结构基本完整,未见基底膜破坏,腺上皮增生不明显,间质内纤维组织少量增生,无或可见少量炎性细胞浸润,其中以高剂量组前列腺组织改善较为明显；阳性药物治疗组前列腺形态学改变介于高、低剂量组两者之间。3、各组大鼠血清及前列腺组织中DHT表达情况检测结果表明,与空白对照组比较,模型组大鼠血清及前列腺组织中DHT含量[(18.04±0.62)ng/ml及(186.14±6.26)pg/mg vs.(7.51±0.67)ng/ml及(79.32±6.06)pg/mg]均明显增高,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,各治疗组大鼠血清及前列腺组织匀浆中的DHT含量均明显降低,差异具有统计学意义(P0.01),其中,以非那雄胺组[(10.11±0.78)ng/ml及(100.63±5.78)pg/mg]下降最明显；而夏荔芪高剂量组血清及前列腺组织中DHT含量均较低剂量组下降明显(P0.01),但夏荔芪高剂量组血清DHT含量与非那雄胺组差异无统计学意义(P0.05),而前列腺组织中DHT含量稍高于非那雄胺组(P0.05)。4、各组大鼠前列腺组织中PCNA及caspase-3表达情况免疫组化结果显示,与空白组相比,模型组大鼠前列腺组织中PCNA表达明显增多,各治疗组与模型组相比,前列腺组织中PCNA表达均有明显降低,其中以阳性对照组下降较为明显。免疫荧光结果显示,与空白组相比,模型组大鼠前列腺组织中caspase-3表达减少,而各治疗组与模型组相比,前列腺组织中caspase-3的表达亦明显增多,其中以阳性对照组增多较显著。5、各组大鼠前列腺组织中bFGF表达水平免疫荧光结果显示,与空白组相比,模型组大鼠前列腺组织bFGF表达明显增多,各治疗组与模型组相比,前列腺组织中bFGF表达均有明显减少,其中以阳性对照组减少较为明显。6、各组大鼠血清及前列腺组织中SOD活性及MDA含量改变情况实验结果显示,与空白组相比,模型组大鼠血清及前列腺组织中SOD活性[(116.05±6.06)U/L及(0.87±0.03)U/g vs.(248.80±6.49)U/L及(2.03±0.11)U/g]均显著降低,差异有统计学意义(P0.01)；与模型组比较,各治疗组大鼠血清及前列腺组织中SOD活性明显增高,差异具有统计学意义(P0.01),其中,以高剂量夏荔芪治疗组[(218.52±7.83)U/L及(1.67±0.05)U/g]升高最明显,低剂量夏荔芪组次之,非那雄胺组升高最不明显,各组间差异有统计学意义(P0.01或P0.05)。与空白组比较,模型组大鼠血清及前列腺组织中MDA含量[(22.62±0.78) nmol/L及(231.08±9.40) pmol/g vs. (6.82±0.60) nmol/L及(99.73±5.97) pmol/g]显著增高,差异有统计学意义(P0.01)；与模型组比较,各治疗组血清及前列腺组织中的MDA含量均有明显降低,差异具有统计学意义(P0.01)；夏荔芪高、低剂量治疗组间MDA的表达水平逐渐递增,其中高剂量夏荔芪治疗组MDA[(11.40±0.51)nmol/L及(126.81±7.84)pmol/g]降低最明显,除低剂量夏荔芪组与非那雄胺组血清MDA含量之间差异无统计学意义外(P0.05),余各组间差异均有统计学意义(P0.01或P0.05)。7、各组大鼠血清及前列腺组织中IL-8、TNF-α含量改变情况ELISA测定结果表明：与空白对照组比较,模型组大鼠血清及前列腺组织中IL-8含量[(17.12±0.73)ng/ml及(174.04±5.24)ng/mg vs.(5.71±0.65)ng/ml及(65.81±3.52)ng/mg]均明显升高,差异均有统计学意义(P0.01)；与模型组比较,各治疗组大鼠血清及前列腺组织中IL-8含量明显降低,差异具有统计学意义(P0.01),其中,以高剂量夏荔芪组[(7.42±0.71)ng/ml及(89.86±6.65)ng/mg]下降最明显,低剂量组次之,非那雄胺组下降最不明显,各组间差异有统计学意义(P0.01)。与空白对照组比较,模型组大鼠血清及前列腺组织中TNF-α含量[(1.80±0.06)ng/ml及(18.26±0.81)pg/mg vs.(0.55±0.04)ng/ml及(7.74±0.64)pg/mg]均明显升高,差异均有统计学意义(P0.01)；与模型组比较,各治疗组大鼠血清及前列腺组织中TNF-α含量明显降低,差异具有统计学意义(P0.01),其中,以高剂量夏荔芪组[(0.84±0.05)ng/ml及(9.91±0.63)pg/mg]下降最明显,低剂量组次之,非那雄胺组下降最不明显,各组间差异有统计学意义(P0.01)。结论1、采用去势后丙酸睾酮5 mg/kg·d皮下注射,连续注射4周后可成功诱导BPH大鼠模型；2、夏荔芪胶囊可显著降低BPH大鼠前列腺湿重及前列腺指数；3、夏荔芪胶囊能明显降低BPH大鼠血清及前列腺组织中DHT含量；4、夏荔芪胶囊能抑制前列腺组织中PCNA的表达,提高caspase-3的表达,调节体内增殖／凋亡水平,改善组织增生状况；5、夏荔芪胶囊能明显抑制前列腺组织bFGF的表达,减轻组织的增生情况。6、夏荔芪胶囊能提高大鼠体内抗氧化物质SOD的活性,降低脂质过氧化产物MDA的水平,提高机体的抗氧化能力；7、夏荔芪胶囊通过降低血清及前列腺组织炎症因子IL-8、TNF-α的表达,减轻前列腺组织的炎症反应；综上所述,夏荔芪胶囊能降低BPH大鼠的前列腺湿重及前列腺指数,通过下调DHT表达,调节组织增殖／凋亡(PCNA/caspase-3)蛋白含量,抑制bFGF的表达,调节体内氧化／抗氧化物质(MDA/SOD)的平衡,抑制血清及前列腺组织内炎症因子(IL-8、TNF-α)的表达等机制,起到治疗大鼠BPH的目的,可作为BPH药物治疗的一个新的选择。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285.5

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈同度,张昌颖;素食大鼠的贫血现象[J];营养学报;1957年04期

2 陈伟强;赵善广;;自制注射用大鼠固定装置[J];上海实验动物科学;1992年04期

3 肖柳英,林培英,冯昭明,张丹;不同周龄的SD大鼠生理、生化及体重的正常值测定[J];中药新药与临床药理;1996年03期

4 李淑云;简易大鼠灌胃器的制作[J];锦州医学院学报;2001年04期

5 杨明智,陈积圣;一种大鼠抓取与固定的新工具介绍[J];上海实验动物科学;2001年03期

6 戴英,陆群;复方H_(505)对Wistar大鼠外周血的血液流变学指标的影响[J];中国血液流变学杂志;2001年01期

7 韦应波,孙喜庆,曹新生,姚永杰,冯岱雅,杨长斌;+Gz暴露时间对大鼠记忆功能和行为的影响[J];航天医学与医学工程;2003年01期

8 吕学军,郭俊生,李敏,周利梅,张永娟;晕船大鼠体内铁含量的变化[J];中国职业医学;2003年04期

9 汤仁仙,王迎伟,王慧,周峰;201A中药合剂对大鼠抗肾小球基底膜肾炎病变的影响[J];徐州医学院学报;2003年06期

10 孙同柱,付小兵,翁立新,梁雪梅,陈伟;介绍一种简易的大鼠保定方法[J];上海实验动物科学;2004年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 尹音;孙振宇;胡敏;李冬霞;;持续性高正加速度对大鼠颞颌关节损伤的作用[A];第八届全国颞下颌关节病学及（牙合）学大会论文汇编[C];2011年

2 祝~=骧;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

本文编号：1152139