益气养阴活血方对糖尿病大鼠肾脏的保护及肾组织基质金属蛋白酶-9表达的影响

发布时间：2017-11-12 16:33

本文关键词：益气养阴活血方对糖尿病大鼠肾脏的保护及肾组织基质金属蛋白酶-9表达的影响

【摘要】：糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病微血管并发症之一,是导致终末期肾病的主要原因。积极防治早期糖尿病肾病对延缓病程进展意义重大。导师张庚良教授根据多年临床经验总结的益气养阴活血方,具有保护肾脏、防治糖尿病肾病进展的作用。目的:本实验通过腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,之后给予药物干预,观察益气养阴活血方对糖尿病大鼠的血糖、血脂、肾功能、24h尿白蛋白排泄率、肾脏肥大指数和肾脏组织基质金属蛋白酶-9表达的影响,探讨本方保护肾脏的作用机理。方法:选用清洁级健康雄性Wistar大鼠60只,体重约230-250g,普通饲料适应性喂养1周后,随机选取12只作为正常对照组(N),余下的48只用于复制糖尿病模型。以55mg/kg体重计算,一次性腹腔注射1%的链脲佐菌素枸橼酸缓冲液(缓冲液浓度0.1mmol/L,p H 4.5)。正常对照组给予相同体积的1%柠檬酸缓冲液一次性腹腔注射。72小时后,取大鼠尾静脉血,测血糖数值≥16.7mmol/L,且大鼠的饮水量及尿量明显增多,则造模成功。将造模成功的48只大鼠随机分为模型对照组(M)、中药益气养阴活血方组(简称中药组,H)、西药厄贝沙坦组(简称西药组,W)、益气养阴活血方联合厄贝沙坦组(简称联合组,H+W),每组12只。造模成功1周后,各治疗组按成人剂量的10倍灌胃给药。中药组给予益气养阴活血方水煎浓缩液10ml/kg(相当于32.5g/kg生药)体重每日灌胃,西药组给予厄贝沙坦片混悬液(阿拉伯胶制)10 ml/kg(相当于2.5mg/ml原药)体重每日灌胃。联合组每日上午给予同等剂量的中药灌胃,每日下午给予同等剂量的厄贝沙坦灌胃。正常对照组和模型组每日给予同等体积的生理盐水灌胃。连续灌胃8周。第8周末,用代谢笼收集24小时尿液,记录尿总量,并测24小时尿白蛋白排泄率。末次灌胃后禁食不禁水12小时,2%戊巴比妥钠20mg/kg体重腹腔注射麻醉,股动脉取血,检测各组大鼠的血糖、肾功能、血脂。取双肾制作标本,用于在光镜下观察肾组织的病理形态改变,免疫组化法检测MMP-9的表达情况。结果:1一般情况正常对照组的大鼠精神状态良好,饮食、饮水及尿量均正常,体重增长明显,毛色光亮,活动自如。模型组大鼠精神不振,出现多食、多饮、多尿,形体消瘦,毛色暗黄,活动减少,反应迟缓。一些大鼠逐渐出现各种糖尿病的并发症,如白内障、感染、四肢水肿等。三个治疗组的大鼠一般情况与模型组相比,有一定程度的改善。模型组和厄贝沙坦组各有1只大鼠因互相撕咬死亡,益气养阴活血方组和联合组分别有1只大鼠死于灌胃不当。2血糖的变化与正常对照组相比,模型组、中药组、西药组、联合组大鼠血糖均明显升高,有显著性差异(P0.05);中药组及联合组有一定的降糖作用,与模型组比较血糖下降明显,有显著性差异(P0.05);西药组与模型组比较降糖效果不明显,无显著性差异(P0.05)。3血脂的变化模型组、中药组、西药组、联合组大鼠的血脂均明显高于正常组;中药组和联合组有一定的降脂效果,与模型组相比,有显著性差异(P0.05);与模型组比较,西药组无显著性差异(P0.05)。4肾脏肥大指数的变化与正常对照组比较,模型组、中药组、西药组、联合组大鼠的肾脏肥大指数升高;与模型组比较,中药组、西药组、联合组的肾脏肥大指数降低,有显著性差异(P0.05);与中药组、西药组比较,联合组的肾脏肥大指数降低,有显著性差异(P0.05)。5肾功能、24h尿白蛋白排泄率的变化与正常对照组比较,模型组、中药组、西药组、联合组的尿素氮、肌酐明显升高,有显著性差异(P0.05);与模型组相比较,中药组、西药组、联合组的尿素氮、肌酐均降低,有显著性差异(P0.05);与中药组、西药组比较,联合组的尿素氮、肌酐降低,有显著性差异(P0.05)。与正常对照组比较,模型组的24小时尿白蛋白排泄率升高明显,有显著性差异(P0.05);与模型组相比较,三个治疗组的24小时尿白蛋白排泄率降低,有显著性差异(P0.05);与中药组、西药组比较,联合组的24小时尿白蛋白排泄率降低,有显著性差异(P0.05)。6肾组织病理改变正常对照组的肾小球结构完整,体积未见增大,肾小球毛细血管基底膜、系膜、基质均正常,未见异常改变。模型组的肾小球体积增大明显,系膜基质增多。与模型组比较,三个治疗组有不同程度的减轻,其中联合组最轻。7肾脏基质金属蛋白酶-9表达的影响MMP-9抗原免疫组化染色为棕黄色,正常组肾组织肾小球及肾小管上皮细胞均有强阳性表达。模型组的肾小球、肾小管的MMP-9表达明显减少,低于正常组。与模型组比较,三个治疗组中MMP-9的表达有不同程度的增强(P0.05),以联合组的表达增加的最明显。结论:1益气养阴活血方可以降低糖尿病大鼠的血糖、血脂、肌酐、尿素氮,减少尿蛋白,有保护肾脏的作用。2益气养阴活血方可以上调肾组织MMP-9的表达,保护肾脏的结构和功能,为研究中药保护肾脏的机制提供新思路。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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