栀子苷对甲型H1N1流感病毒抑制效应的实验研究

发布时间：2017-12-08 08:02

  本文关键词：栀子苷对甲型H1N1流感病毒抑制效应的实验研究

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【摘要】：目的：观察栀子苷对甲型H1N1流感病毒感染马丁达比犬肾上皮(MDCK)细胞的细胞病变效应(cytopathic effects, CPE)的抑制作用；探讨栀子苷对甲型H1N1流感病毒小鼠肺炎模型肺部炎症及肺组织内病毒复制的影响。方法：体外实验,采用MTT法判定栀子苷对MDCK细胞的毒性作用,以帕拉米韦为阳性对照药,根据MTT比色值(OD),在不同给药方式(预防给药、直接灭活及治疗给药)及不同药物剂量干预下,观测栀子苷对甲型H1N1流感病毒(A/Jiangsu/1/2009 (NT0901))感染MDCK细胞的CPE的抑制作用,计算栀子苷对甲型H1N1流感病毒的抑制效率；体内实验,6-8周龄ICR小鼠按照随机原则分为对照组、病毒感染组、栀子苷低剂量(5mg/kg)治疗组、栀子苷中剂量(10mg/kg)治疗组、栀子苷高剂量(20mg/kg)治疗组、帕拉米韦(30mg/kg)治疗组及联合治疗组(20 mg/kg栀子苷+30mg/kg帕拉米韦),每组10只。第0天,小鼠在乙醚麻醉后予以NT0901病毒滴鼻攻击建立甲型H1N1流感病毒模型,从病毒攻击后第1天开始,予以药物腹腔注射,每天1次,连续两周。每日观察并记录小鼠一般情况、体重变化率及存活率；第5天取肺组织测定小鼠肺指数；分别于第3天和第6天取肺组织测定肺内病毒滴度的变化；第6天取肺组织进行肺组织病理石蜡切片苏木精-伊红(HE)染色,观察肺组织炎症浸润情况,采用免疫组化检测肺组织内甲型H1N1流感病毒核蛋白(nucleoprotein, NP)的表达,并用Image pro plus 6.0软件就NP阳性染色面积/基底膜长度比值进行比较；运用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠肺组织匀浆中炎性细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-10的水平。结果：体外实验结果显示,栀子苷对MDCK细胞的半数中毒浓度TD50 (median toxic dose)1040 μmol/L;在预防、直接灭活及治疗给药方式下,栀子苷对NT0901病毒感染MDCK细胞的半数有效药物浓度EC50 (concentration for 50% of maximal effect)分别为91.90、96.25、87.68 μmol/L。在不同给药方式下,栀子昔对CPE有明显抑制作用(P0.05),且呈剂量依赖性；体内实验结果显示,成功建立了甲型H1N1流感病毒(A/Jiangsu/1/2009(NT0901))小鼠肺炎模型,栀子苷各剂量组小鼠肺指数、肺内病毒滴度较病毒组显著降低(P0.05)。肺组织HE染色结果显示,病毒感染组小鼠肺脏正常肺组织结构消失,支气管、细支气管壁及其周围组织和小叶间隔等肺间质充血水肿,炎性细胞大量浸润,而栀子苷20 mg/kg治疗组炎性浸润状况则明显减轻；免疫组化结果显示,栀子苷10、20 mg/kg治疗组小鼠肺组织NP阳性染色面积／基底膜长度比值与病毒感染组相比显著减少(P0.05)。肺组织匀浆ELISA法测定结果显示,栀子苷20 mg/kg治疗组TNF-α、IFN-γ、IL-6水平较病毒组显著降低(P0.05),而IL-4、IL-10较病毒组显著升高(P0.05)。结论：栀子苷在体外有效抑制甲型H1N1流感病毒(A/Jiangsu/1/2009(NT0901))对MDCK细胞的CPE；栀子苷在体内明显减轻甲型H1N1流感病毒模型小鼠的肺部炎性浸润,显著降低肺组织中的病毒滴度,从而有效保护病毒对小鼠肺部的攻击作用。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285.5

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