NF-κB-vimentin在邻苯二甲酸二丁酯刺激类固醇激素合成中的作用

发布时间：2018-01-24 12:56

本文关键词： 邻苯二甲酸二丁酯邻苯二甲酸单丁酯类固醇激素合成 vimentin NF-κB　出处：《南京医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景与目的邻苯二甲酸酯(phthalates,PAEs)是一类重要的环境污染物,在全球环境中已达到普遍检出的程度,人群暴露非常普遍。邻苯二甲酸二丁酯(di-n-butyl phthalate,DBP)是污染最严重、机体内暴露水平最高的PAEs之一。DBP活性代谢产物为邻苯二甲酸单丁酯(monobutyl phthalate,MBP)。前期的研究主要针对DBP对雄性生殖发育的干扰作用,但关于DBP/MBP暴露下对雌性生殖发育影响的研究却很少,尤其是低剂量下暴露。本次研究探讨低剂量邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对类固醇激素合成的刺激作用以及NF-κB-vimentin信号通路在DBP干扰类固醇激素合成中的作用。方法1.21天龄雌性SD大鼠按体重随机分成7组,分别是溶剂对照组、注射对照组、1mg/kg/dayDBP、10mg/kg/dayDBP、500mg/kg/dayDBP、PDTC 组以及1mg/kg/day DBP+PDTC组。从出生后21天开始处理直到出生后33天,共13天。第34天麻醉取血,动物处死后取卵巢、子宫等组织,称重后,一部分保存子宫和卵巢保存于4%多聚甲醛中,另外一部分置于-80℃保存。2.原代培养卵巢颗粒细胞(mGCs)作为体外细胞模型,免疫荧光细胞化学法测定细胞纯度。3.CCK-8法测定mGCs细胞活力。4.ELISA检测大鼠血清和细胞培养液上清中孕酮和雌二醇水平。5.免疫组织化学检测大鼠卵巢组织中vimentin表达。6.免疫荧光细胞化学染色联合激光共聚焦法观察mGCs vimentin表达。7.qRT-PCR测定大鼠组织和mGCs细胞中vimentin mRNA表达。8.Western Blot 测定大鼠组织和 mGCs 细胞中 vimentin、NF-κB p65 和 p-p65蛋白表达。9.应用RNAi技术下mGCs细胞中vimentin的表达,再用MBP(10~(-10)M)刺激mGCs,观察mGCs类固醇激素合成的改变。10.EMSA法检测NF-1κB与vimentin启动子区域结合活力。结果1.大鼠子宫在1mg/kg/day DBP暴露后,体积和重量明显高于对照组(P0.05)。2.mGCs 的纯度为(94.7±1.9)%。3.与对照组相比,mGCs 活性在 10~(-12)、10~(-11)、10~(-10)、10~(-9)、10~(-8)、10~(-7)、10~(-6)M MBP暴露后,均没有明显变化。4.与对照组相比,大鼠在1mg/kg/day和10mg/kg/dayDBP暴露后,血清孕酮合成明显增加,500mg/kg/dayDBP暴露后,则明显减少(P0.05)。而血清雌二醇合成各剂量组均明显下降。相对于对照组,mGCs在10~(-10)M MBP暴露后,孕酮合成明显增加(P0.05),而雌二醇合成无明显改变。5.1mg/kg/day DBP暴露后,大鼠卵巢vimentin蛋白和mRNA表达量明显高于对照组。500mg/kg/day DBP暴露下,vimentin蛋白和mRNA表达量明显低于对照组(P0.05)。mGCs暴露于10~(-10)MMBP,vimentin蛋白表达量相对于对照组明显增加(P0.05)。6.当抑制mGCs vimentin表达后,孕酮合成量也随之减少(P0.05)。7.大鼠注射PDTC明显下调大鼠卵巢vimentin表达和孕酮合成,并阻滞DBP对vimentin表达和孕酮合成的刺激作用(P0.05)。BAY11-7082明显降低mGCs vimentin表达和孕酮合成,并阻滞MBP对vimentin表达和孕酮合成的刺激作用(P0.05)。8.EMSA实验结果表明,MBP(10~(-10)M)增加NF-1κB与vimentin启动子区域结合活性(P0.05)。结论低剂量DBP/MBP可以通过诱导p-p65表达上调,从而进一步刺激vimentin表达和孕酮合成增加,最终促进雌性生殖发育。
[Abstract]:BACKGROUND & OBJECTIVE : Phthalate ( PAEs ) is a kind of important environmental pollutant , which has been generally detected in the global environment . The population exposure is very common . Dibutyl phthalate ( di - n - butyl phthalate , DBP ) is one of the most polluted and most exposed PAEs in the body . The DBP active metabolite is monobutyl phthalate ( MBP ) . The effects of DBP on the development of female reproductive development were studied . The effects of low dose dibutyl phthalate ( DBP ) on steroid hormone synthesis and the effect of NF - 魏B - vimentin signaling pathway on the synthesis of vimentin were studied . Conclusion Low - dose DBP / MBP can increase the expression of vimentin and increase the synthesis of progesterone , and eventually promote the development of female reproductive development .

【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R114

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