miRNA-1在离体大鼠心脏缺血后处理中对缝隙连接蛋白43的作用

发布时间：2018-02-02 17:17

本文关键词： 缺血后处理再灌注心律失常 miRNA-1 缝隙连接蛋白43 离体心脏　出处：《天津医科大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景：急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)严重威胁人类健康,再灌注治疗是目前拯救濒死心肌和改善预后的最主要措施,但是缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury, IRI)使获益大打折扣。缺血后处理(ischemia postconditioning, I-postC)可保护心肌,减轻IRI。缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)是参与IRI的重要蛋白,是缝隙连接(gap junction, GJ)的主要构成成分,Cx43数量和分布的改变与GJ电耦联以及再灌注心律失常(reperfusion arrthymia, RA)和心肌梗死范围等密切相关。miRNA-1是参与调控IRI的主要miRNA之其过表达可以加重IRI, I-postC可抑制它过表达。已有研究表明Cx43是miRNA-1的作用靶点之一。但是,在缺血再灌注及后处理时miRNA-1能否通过影响Cx43的表达和分布参与IRI的调节目前尚不明确。目的：1、观察Ⅰ-postC对Cx43表达、分布和miRNA-1表达以及对RA、左室发展压(left ventricular develop pressure, LVDP)、心肌梗死面积的影响；2、观察miRNA-1在离体大鼠心脏Ⅰ-postC中对Cx43表达和分布的作用。方法：将55只Wistar雄性大鼠随机分为正常组(N组)、缺血.再灌注组(I-R组)、缺血后处理组(Ⅰ-postC组)、agomir-1+缺血后处理组(agomir-1组)和antagomir-1+缺血后处理组(antagomir-1组),各11只。其中,agomir-1组和antagomir-1组分别给予agomir-1(100pmol.kg-1.d-1)及antagomir-1(200pmol.kg-1.d-1)行尾静脉注射3日。然后在进行肝素化和麻醉后,开胸取心,应用Langendorff逆行灌流系统对离体心脏进行灌流。N组：不结扎前降支；I-R组：结扎前降支30min后,行再灌注；Ⅰ-postC组、agomir-1组及antagomir-1组：结扎前降支30min后,行后处理。记录分析RA、LVDP、心肌梗死面积。采用RT-PCR、Western Blot和免疫组织化学方法观察各组大鼠离体心脏左室心肌miRNA-1表达和Cx43蛋白表达与分布的情况。应用SPSS20.0进行统计学分析,P0.05为差异有统计学显著性意义。结果：1、各组间RA的比较：各组间RA评分有差异(P0.05)。与N组比较,I-R组RA评分增高(P0.01),而Ⅰ-postC组与N组无差异。Ⅰ-postC组比I-R组的VT、VF时程缩短、发生率降低,RA评分降低(P0.01)；而与Ⅰ-postC组比较,agomir-1组VT的时程延长、发生率升高,RA评分增高(均P0.01)；antagomir-1组RA无差异。 2、各组间LVDP的比较：基础态,各组间LVDP无差异(P0.05)；缺血态,I-R组、Ⅰ-postC组、agomir-1组及antagomir-1组LVDP均比N组降低(均P0.01)；再灌注态,I-R组和agomir-1组的LVDP继续降低,LVDP比N组低(均P0.01),在Ⅰ-postC组和antagomir-1组,LVDP均比缺血态升高,与N组无差异。与Ⅰ-postC组相比,agomir-1组LVDP降低(P0.05),而antagomir-1组无差异。 3、各组心肌梗死面积比较：I-R组、Ⅰ-postC组、agomir-1组、antagomir-1组心肌梗死面积分别为(50.44±1.39)%,(27.58±1.05)%,(62.72±1.20)%,(27.25±1.29)%(P0.01)。I-R组、agomir-1组梗死面积大于Ⅰ-postC组(均P0.01), Ⅰ-postC组和antagomir-1组比较无差异。 4. miRNA-1RT-PCR结果：与N组比较,I-R组miRNA-1表达增高约2.6倍,Ⅰ-postC组比I-R组miRNA-1表达降低约50%(P0.01)；与Ⅰ-postC组比,agomir-1组表达增高约78%(P001), antagomir-1组表达降低32%(P0.01)。 5. Western Blot结果：I-R组比N组Cx43表达减少,Ⅰ-postC组比I-R组Cx43表达增多,并接近于N组水平；与Ⅰ-postC组比较,agomir-1组Cx43表达减少,但仍高于I-R组,antagomir-1组Cx43表达无差异。 6、Cx43免疫组化结果：与N组比较,I-R组和agomir-1组阳性表达量少且排列紊乱,在端端连接分布减少,侧侧连接分布增多。Ⅰ-postC组和antagomir-1组,Cx43阳性表达增多,分布较规则。与Ⅰ-postC组比较,agomir-1组阳性表达量少,排列紊乱,而antagomir-1组无明显差异。结论：1、Ⅰ-postC可抑制再灌注引起的miRNA-1过表达,Cx43减少和再分布,减少RA发生,改善LVDP,缩小心肌梗死面积。 2、Ⅰ-postC时,miRNA-1的表达下调,抑制Cx43表达减少和再分布,减轻IRI,发挥心肌保护作用。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R542.22

【参考文献】