趋化因子CXCL13对骨癌痛大鼠吗啡镇痛作用的影响

发布时间：2018-03-13 10:06

  本文选题：趋化因子　切入点：CXCL13　出处：《郑州大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景肿瘤细胞的无限增殖和转移是肿瘤发生的根本,临床上肿瘤常以全身性的破坏形式出现,表现为一系列的症状。全球每年新发的癌症病例有900万例之多,其中30%~50%的癌症患者经历各种形式的疼痛,特别是晚期癌症患者伴有疼痛比例可高达75%~90%。在肿瘤引起的各种形式的疼痛中,转移性骨癌痛是最常见的类型之一,严重影响患者的生活,造成重大心理负担。目前骨癌痛的发生机制我们理解的还不是太充分,骨癌痛治疗方面也不尽如人意。世界卫生组织指南指出骨癌痛的治疗按阶梯治疗从非阿片类药到强阿片类药,同时给予辅助性的治疗如双磷酸盐、局部放射治疗等。基于此,有必要对骨癌痛的机制做进一步研究,目前大家公认的与骨癌痛的发生机制包括:兴奋性的突触的产生、神经胶质细胞的激活和促炎介质的高表达。其中促炎介质中的趋化因子在骨癌痛发展中的作用目前引起了极大的关注。作为细胞因子中的具有趋化作用的一类小分子,有50多个家庭成员,主要介导外周免疫系统细胞的迁徙。近来越来越多的证据证实趋化因子不单单表达于外周神经系统,还表达在中枢神经系统,参与中枢神经系统生理性和病理性的调节。根据趋化因子家族中四个保守半胱氨酸残基的顺序将其分为4类。原则上,趋化因子和其同来源的受体相结合来发挥作用,结合后激活细胞内的信号传导通路。目前为止,发现的和骨癌痛相关的趋化因子及其受体包括ccl2/ccr2、cx3cl1/cx3cr1、ccl5/ccr5、cxcl12/cxcr4、cxcl10/cxcr3和cxcl1/cxcr2。吗啡是μ阿片受体激动剂,通过阿片受体发挥镇痛作用,是目前临床常用的治疗骨癌痛的药物。前期基因芯片研究结果示骨癌痛大鼠中趋化因子cxcl13基因的高表达。近期在脊神经结扎造成的神经病理性痛模型实验中发现脊髓中趋化因子基因上调,尤其是最初来源于b淋巴细胞淋巴结细胞基质的cxcl13,其基因上调幅度最大。无论是在中枢还是在外周疼痛信号通路中,趋化因子和吗啡在机体免疫、炎症性成、神经元的特定的反应中都发挥了重要的作用。目前发现的参与了吗啡镇痛的调节的细胞因子包括cx3cl1、cxcl12、cxcl10、ccl2、ccl3和ccl5等。然而,在骨癌痛大鼠中,趋化因子cxcl13和吗啡镇痛之间的作用还没有明确的研究。目的探究在正常大鼠和骨癌痛大鼠中趋化因子cxcl13对吗啡镇痛作用的影响,从而为骨癌痛的治疗提供新的依据。方法1.walker256乳腺癌细胞的制备购自华中科技大学研究室的walker256乳腺癌细胞腹腔注射入重160~180g的清洁级sd雌性大鼠。注射后每天观察种植癌细胞的大鼠腹部变化,待5~7天形成腹水后抽取。将抽取的腹水用d-hanks液漂洗离心至少3次,离心转数600r/min,每次离心5min。所得癌细胞放于冰块上备用。2.实验动物清洁级的sd雌性大鼠购自郑州大学动物实验中心,重约180~220g。喂养环境室温在24±0.5°c,昼夜各12小时,自由饮食。3.动物实验分组骨癌痛模型建立:雌性清洁级sd大鼠24只,重约180~220g,随机分为3组分别为正常组、假手术组、骨癌痛组。分别测定3组建模后0、1、3、5、7、10、14、21天大鼠的机械缩足阈值。cxcl13蛋白的表达:雌性清洁级sd大鼠24只,重约180~220g,随机分为2组分别为假手术组和骨癌痛组,用免疫印迹技术测定大鼠0、7、14、21天时大鼠cxcl13蛋白的表达水平。cxcl13对正常大鼠的作用:雌性清洁级sd大鼠24只,重约180~220g,随机分为4组,分别为盐水组、吗啡组、cxcl13重组蛋白组、cxcl13重组蛋白+吗啡组,鞘内给药后,分别测定给药前、给药后15min、30min、60min、90min和120min时大鼠机械缩足阈值的变化情况。cxcl13在骨癌痛大鼠中对吗啡镇痛作用的影响:同正常大鼠。4.试验药物及其给药方式μ阿片药物受体激动剂,吗啡购自中国东北制药集团公司。大鼠cxcl13重组蛋白购自美国的派普泰克公司。所有的药物均是鞘内给药,将pe-10管置入脊髓蛛网膜下腰膨大部位,给药体积为10ul。5.骨癌痛模型的制备根据既往骨癌痛模型的建立的报道,大鼠骨癌痛模型的建立采用购自华中科技大学研究室的walker乳腺癌细胞(10ul4x106细胞/毫升)种植在大鼠近胫骨段的骨髓腔里。6.鞘内置管与骨癌痛大鼠模型麻醉方式相同,按既往报道将pe-10导管置于大鼠的蛛网膜下腔腰膨大的位置。7.行为学测试将大鼠放于带有金属丝网格的玻璃笼子里,测试前放置金属丝网中30min。用vonfrey细丝测试所有大鼠的足趾的机械缩足阈值(mwt)。每次测试持续5s,每只大鼠重复测试5次,每次间隔10min。8.免疫印迹实验用蛋白免疫印迹的发法检测骨癌痛大鼠和正常组大鼠在0、7、14、21天时cxcl13蛋白和其受体cxcr5的表达。结果1.与正常组和sham组相比,骨癌痛组在1、3、5、7、10、14、21天时差异具有统计学意义。正常组和sham组相比,各个时间点的mwt值均无统计学意义(p0.05)。骨癌痛大鼠中各个时间点中与第0天相比第3、5、7、10、14、21时MWT值差异均具有统计学意义(P0.05),特别是14天时,MWT的值最低,说明骨癌痛模型建立成功。2.用蛋白免疫印迹实验检测骨癌痛组和假手术组中CXCL13蛋白和其受体CXCR5的表达水平。与sham组相比,骨癌痛大鼠在建模后7、14、21天中的CXCL13和CXCR5的表达量增加,差别均具有统计学意义(P0.05)。建模后14天时CXCL13和CXCR5蛋白的表达量最多,与骨癌痛大鼠MWT值相一致,说明骨癌痛大鼠中CXCL13的表达增加使大鼠的MWT值降低。3.正常大鼠中,与盐水组相比,吗啡组大鼠的MWT值明显上升(P0.05),CXCL13重组蛋白组大鼠的MWT值明显下降(P0.05)。与吗啡组相比,CXCL13重组蛋白+吗啡组的MWT值下降(P0.05)。说明CXCL13对正常大鼠具有致痛作用并且减弱吗啡的镇痛作用。4.骨癌痛大鼠中,与盐水组相比,CXCL13重组蛋白组在60min时MWT值差异具有统计学意义(P0.05),吗啡组MWT值各个时间点均具有统计学意义(P0.05)且MWT值均升高。与单纯吗啡组相比,CXCL13重组蛋白+吗啡混合物组的MWT值在30min、60min时差异具有统计学意义(P0.05)。进一步说明在骨癌痛大鼠中CXCL13对吗啡的镇痛具有负性调节作用。结论趋化因子CXCL13具有致痛作用,在骨癌痛大鼠中其表达的上调减弱吗啡的镇痛作用。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R730.5

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 陈艳青,周朝明;癌痛治疗的现状[J];现代康复;2000年10期

2 俞伟平;癌痛治疗服务的区域及网络建设[J];中国肿瘤;2000年12期

3 杜华,严小蓉;影响癌痛治疗因素的分析及对策[J];现代护理;2001年03期

4 陈辉,杨锡馨;我国癌痛治疗现状的思考[J];医学与社会;2001年03期

5 孟志强,于尔辛;癌痛的治疗和中医药的作用[J];中华肿瘤杂志;2003年04期

6 ;全国癌症止痛与姑息治疗培训班暨癌症急危重症治疗学术研讨会通知[J];中国肿瘤;2004年06期

7 罗爱伦;黄宇光;;译后评论:癌痛治疗需要规范化[J];英国医学杂志(中文版);2006年01期

8 陆静;;癌痛综合治疗的现状及分析[J];基层医学论坛;2006年03期

9 水源;樊碧发;;癌痛治疗的新进展[J];中国处方药;2006年10期

10 赵永明;王晓稼;;187例癌痛患者对癌痛控制认识调查分析[J];中国肿瘤;2007年02期

相关会议论文 前10条

1 ;全社会都要关注癌痛治疗[A];湖北省抗癌协会肿瘤护理专业委员会2012年度学术交流大会论文汇编[C];2012年

2 王彦青;毛应启梁;米文丽;吴根诚;;电针对癌痛的缓解作用研究[A];第九届全国针刺麻醉针刺镇痛及针刺调整效应学术研讨会论文集[C];2007年

3 汪潇;;关于癌痛的治疗[A];浙江省中西医结合学会第二届老年病专业委员会第一次年会学术论文集[C];2007年

4 于洋;于世英;;癌痛规范化诊疗评估指标体系的构建研究[A];第七届全国癌症康复与姑息医学大会大会论文集和专题讲座[C];2011年

5 洪若熙;罗健;;第十四届世界临床疼痛大会暨第一届亚洲疼痛大会和第四届中国临床疼痛学术会议癌痛治疗论坛简介[A];第六届中国癌症康复与姑息医学大会大会论文集和专题讲座[C];2010年

6 罗志琴;;癌痛规范化治疗示范病房的建设与效果[A];中华护理学会全国肿瘤护理新进展研讨会论文汇编[C];2012年

7 谢广茹;;全社会都要关注癌痛治疗[A];中华护理学会第9届全国造口、伤口、失禁护理学术交流会议、中华护理学会全国外科护理学术交流会议、中华护理学会全国神经内、外科护理学术交流会议论文汇编[C];2012年

8 谢广茹;;全社会都要关注癌痛治疗[A];中华护理学会全国肿瘤护理新进展研讨会论文汇编[C];2012年

9 刘红丽;李珍;叶志华;豆艳;;影响患者癌痛控制障碍的因素及对策[A];2012年“河南省肿瘤专科护士职业安全防护及新技术交流”学术会议论文集[C];2012年

10 王亚坤;谢长生;;癌痛的中西医治疗及临床研究进展[A];2013年浙江省中医药学会肿瘤分会、浙江省抗癌协会中医肿瘤专委会学术年会暨省级继续教育学习班文集[C];2013年

相关重要报纸文章 前10条

1 刘道安邋孙晓军;郑宝森谈癌痛治疗现状[N];中国中医药报;2008年

2 解放军307医院肿瘤科副主任 吴世凯　河北省肿瘤医院教授 刘巍 中国抗癌协会副秘书长 刘端祺;摆脱癌痛,让生命回归尊严[N];健康报;2011年

3 北京大学肿瘤医院药剂科 杨锐;癌痛治疗还需再充分一些[N];中国医药报;2012年

4 上海岳阳中西医结合医院肿瘤科 宋伟祥;关注癌痛治疗 突出人文关怀[N];上海中医药报;2013年

5 本报记者 邹左功;别让癌痛走近[N];健康报;2001年

6 本报记者 叶芳 通讯员 伍晓毅;癌痛:需长期定时用药镇痛[N];广东科技报;2008年

7 天津市肿瘤医院疼痛科主任 王昆　李运红 胡颜 整理;三阶梯止癌痛 微创位次前移[N];健康报;2008年

8 张献怀;癌痛治疗让患者活得有尊严[N];人民日报海外版;2009年

9 本报记者 叶芳 通讯员 陈捚;癌痛要主动说出来[N];广东科技报;2009年

10 健康时报特约记者 吴志;治癌痛需打“组合拳”[N];健康时报;2009年

相关博士学位论文 前10条

1 许永广;前扣带皮层吻侧部神经元NR2B亚基参与骨癌痛形成的分子机制[D];山东大学;2015年

2 宋振鹏;MHC Ⅱ参与骨癌痛形成的机制研究[D];华中科技大学;2016年

3 刘希江;靶向抑制延髓下行易化作用在大鼠骨癌痛中的镇痛效应及其机制研究[D];华中科技大学;2012年

4 胡计[;脊髓MCP-1调控Fractalkine分泌致大鼠骨癌痛的神经免疫机制[D];苏州大学;2013年

5 毛应启梁;大鼠脊髓胶质细胞在癌痛中的功能活动变化及电针缓解癌痛作用观察[D];复旦大学;2007年

6 李强;规范药物管理对癌痛治疗的临床和社会价值探讨[D];天津大学;2012年

7 黄东;NR2B在小鼠骨癌痛中的作用及机制研究[D];中南大学;2010年

8 缪雪蓉;Nav1.8在骨癌痛大鼠痛觉过敏维持机制中的作用研究[D];第二军医大学;2009年

9 刘苏;EphrinB2-EphB1受体信号通路在骨癌痛中的作用及机制研究[D];第四军医大学;2011年

10 张斌;芷辛方治疗癌痛及TLR-NF-Kappa B信号通路的机制研究[D];南京中医药大学;2014年

相关硕士学位论文 前10条

1 马亚兵;氨酚羟考酮片治疗癌痛有效性和安全性的Meta分析[D];兰州大学;2015年

2 金迪;MCP-1/PI3K/Akt信号通路参与骨癌痛调控及机制[D];苏州大学;2015年

3 王玉华;中药止痛巴布贴对骨癌痛模型小鼠镇痛机制的研究[D];辽宁中医药大学;2015年

4 杨娜娜;内皮素A受体在卵巢癌癌痛传导中的作用[D];河北医科大学;2016年

5 程斌;癌痛规范化治疗示范医院临床药师工作模式建立及其应用研究[D];浙江大学;2016年

6 秦明秀;活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶在骨癌痛—吗啡耐受大鼠脊髓中的表达变化[D];广西医科大学;2017年

7 田萍;癌痛规范化管理对患者和家属生活质量的影响以及治疗过程中家属的作用[D];遵义医学院;2017年

8 李伟娟;同济医院肿瘤中心癌痛治疗现状及医患对癌痛治疗认知情况的调查[D];华中科技大学;2016年

9 张露瑶;北京市大兴地区医师对癌痛治疗相关知识认知水平的调查研究[D];首都医科大学;2017年

10 陈赛里;癌痛贴治疗癌性疼痛的实验和临床研究[D];湖北中医药大学;2011年

，

本文编号：1605908