GLP-1通路在电针胃脘下俞改善骨骼肌胰岛素抵抗中的机制研究

发布时间：2018-04-10 20:19

本文选题：电针 + 骨骼肌　；参考：《北京中医药大学》2016年博士论文

【摘要】：目的：本研究旨在观察电针“胃脘下俞"穴对2型糖尿病动物血糖、血脂、胰岛素抵抗状况等基础指标的干预作用的基础上,探讨电针可能的起效途径；以神经节段支配理论解释电针“胃脘下俞”等背俞穴的干预效果,从神经解剖学角度对背俞穴主治功能规律提出解释,并探讨胰高血糖素样肽1 (glucagon-like peptide-1, GLP-1)-环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)-磷脂酰肌醇3激酶(Phosphatidylinositol-3-Kinase, PI3K)-葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter4, GLUT4)通路在电针干预2型糖尿病大鼠骨骼肌胰岛素抵抗中的作用,为针灸治疗2型糖尿病的临床实践提供依据。方法：研究以高糖高脂饲料喂养结合小剂量链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)腹腔注射制备2型糖尿病动物模型,将成模动物分为模型组、电针“胃脘下俞”组、电针“心俞”组、电针“肾俞”组、电针“后三里”组(n=12)。以2Hz,2mA低频电针刺激相应穴位,20min/次,6次／周,4周进行干预。于干预前及每周干预结束后检测各组动物空腹血糖,观察电针对2型糖尿病动物血糖的调控规律；于干预前及全部干预结束后进行口服葡萄糖耐量实验(oral glucose tolerance test, OGTT),计算OGTT曲线下面积,观察电针对模型动物糖耐受的调控；于全部干预结束后以戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠,腹主动脉取血致死,分离血清检测总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、胰高血糖素样肽1含量；取胰腺制备石蜡切片进行HE染色及Masson染色,观察电针对胰岛及B细胞结构和功能的影响；取胰腺及股四头肌,western blot法检测GLP-1受体蛋白表达,以及cAMP、PI3K (Y607)、GLUT4在骨骼肌中蛋白表达,验证研究假设的骨骼肌GLP-1-cAMP-PI3K-GLUT4通路在电针干预2型糖尿病及骨骼肌胰岛素抵抗中的作用。结果：各种电针干预均能产生降血糖作用。其中,电针“胃脘下俞”组可在干预第3、第4周末显著降低模型动物空腹血糖(P0.01,P0.05),电针“心俞”组可在干预第2、第3周末显著降低模型动物空腹血糖(P0.05,P0.01)。电针“胃脘下俞”还可以显著降低模型动物血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、三酰甘油含量(PO.01,P0.01, P0.01), OGTT曲线下面积(P0.05),以及胰岛素抵抗指数(P0.01)。对电针的上述干预效果的机理研究显示,电针可降低模型动物显著升高的血浆活性GLP-1含量,显著增高模型动物骤减的胰腺GLP-1受体蛋白表达(P0.05),降低其激增的骨骼肌GLP-1受体蛋白表达(P0.01),并对骨骼肌中GLP-1信号的下游指标PI3K (Y607)及GLUT4产生有效的良性调节作用。结论：本研究以高糖高脂饲料喂养结合小剂量STZ腹腔注射的造模方法能很好地模拟2型糖尿病患者高血糖、高血脂以及胰岛素抵抗症状。电针“胃脘下俞"可以显著降低模型动物激增的血糖、血脂指标。其对2型糖尿病的干预主要通过改善胰岛素抵抗状态实现。电针“胃脘下俞”对骨骼肌胰岛素抵抗的改善一部分通过上调骨骼肌PI3K-GLUT4通路活性实现,但该段通路的启动与GLP-1信号关联性不强,应涉及其它通路的调控,即研究所假设的GLP-1-cAMP-PI3K-GLUT4通路存在进一步改进的空间。电针“心俞”和电针“肾俞”对血糖和血脂等基础指标有一定的改善作用,可对其中部分指标产生显著的良性调节。其中,电针“心俞”穴主要通过改善胰岛及B细胞形态和结构实现干预2型糖尿病的作用,电针“肾俞"侧重于调控胰岛素抵抗状态。在本研究所选穴位当中,干预作用由强到弱依次为胃脘下俞、心俞、肾俞、后三里,上述穴位在降糖作用的起效时间、作用强度、效果维持时间上各不相同,其起效机理存在一定差异,临床治疗2型糖尿病时可以根据各穴位的作用特点联合应用,优化疗效。
[Abstract]:Objective : To study the effect of electroacupuncture on insulin resistance in rats with type 2 diabetes mellitus . The effects of electroacupuncture on insulin resistance in rats with type 2 diabetes mellitus were studied . The effect of electroacupuncture on insulin resistance in skeletal muscle of rats with type 2 diabetes mellitus was explained . The effects of glucagon - like peptide - 1 ( GLP - 1 ) - cyclic adenosine monophosphate ( cAMP ) - phosphoinositide 3 - kinase ( GLUT4 ) pathway on insulin resistance in rats with type 2 diabetes mellitus were studied .
Oral glucose tolerance test ( OGTT ) was performed before and after all intervention , and the area under OGTT curve was calculated , and the regulation of glucose tolerance in model animal was observed .
The total cholesterol , triglyceride , high density lipoprotein cholesterol , low density lipoprotein cholesterol and glucagon - like peptide 1 were detected by intraperitoneal injection of sodium opental into abdominal aorta after all intervention .
The paraffin sections were stained with HE and eosin staining to observe the effect of electroacupuncture on the structure and function of islet and B cells .
The expression of GLP - 1 receptor protein was detected by western blot , and the effects of cAMP , K 3 K ( Y607 ) and GLUT4 on insulin resistance of skeletal muscle were studied . In this study , the effect of electroacupuncture on insulin resistance of rats was studied by improving the expression of GLP - 1 receptor protein in skeletal muscle ( P0.05 ) .

【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R245

【参考文献】