基于液质联用技术的右兰索拉唑生物等效性评价和QO-58lysine在大鼠体内代谢、排泄研究

发布时间：2018-04-22 13:43

  本文选题：LC-MS/MS + HPLC-QTOF-MS　； 参考：《河北医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：右兰索拉唑属于质子泵抑制剂,是由日本武田公司研发的治疗食管炎的新药,本药在剂型上采用双延迟释放(DDR)系统,延长了药物的作用时间,增强了患者的依从性,临床疗效明显,因专利保护于2020年即将到期,因此该药成为仿制热点。QO-58是经过高通量筛选得到的一种全新KCNQ型钾离子通道开放剂,药效学初步研究提示其具有抗惊厥、抗癫痫以及镇痛等作用,其赖氨酸盐(QO-58 lysine)改善了吸收,提高了疗效,在完成了前期药理、毒理及部分药代、毒代研究的基础上,开展本次体内代谢、排泄研究,为新药的研发提供实验依据。LC-MS/MS技术是将液相色谱分离与质谱检测手段相结合的技术,具有分离能力强、监测灵敏度高和专属性强等特点,成为新药研发和体内外药物分析的重要手段。本课题运用此技术研究了国内高仿的武田Dexilant产品(右兰索拉唑缓释胶囊)在Beagle犬体内的生物等效性,为一致性评价提供实验参考;同时还研究了QO-58 lysine在大鼠体内的排泄动力学,分析了QO-58 lysine在大鼠体内的多种代谢产物,该研究结果为进一步的开发利用QO-58 lysine提供了重要的实验依据。第一部分右兰索拉唑缓释胶囊在Beagle犬体内的生物等效性评价目的:研究右兰索拉唑的受试药物和参比药物(Dexilant)在Beagle犬体内是否具有生物等效特征。方法:1样品收集:本实验采用双周期随机交叉设计,每一个周期,饲喂30mg右兰索拉唑缓释胶囊。从Beagle犬腿部静脉处采集血液至真空肝素管,分别收集给药前和给药后0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0、12.0 h时间点的血液样本。2样品预处理:采用液液萃取法(乙酸乙酯)进行处理。3检测条件:采用Phenomenex C18分析柱,流动相为甲醇(A):2 m M乙酸铵水溶液(B),采用梯度洗脱程序。检测方式为正离子、多离子反应监测(MRM),用于定量分析的离子反应分别为m/z 369.8→252.0(右兰索拉唑),m/z 345.9→198.0(内标,IS,奥美拉唑)。4生物等效性:计算药代动力学参数,对AUC0-t、AUC0-∞、Cmax经过对数转换后,采用双单侧t检验法进行检验,判断两种制剂是否生物等效。结果:1右兰索拉唑在Beagle犬血浆中的线性关系良好(r≥0.9960),日内精密度和日间精密度符合要求,无明显基质效应,稳定性良好。2单剂量给予试验药物和参比药物,血浆中右兰索拉唑的主要药代动力学参数(AUC0-t、AUC0-∞和Cmax)经对数转换后进行双单侧t检验,其结果说明两种制剂间没有显著性差异。结论:本实验建立的LC-MS/MS方法,具有简单可靠等特点,能够满足生物样品的分析要求。两种右兰索拉唑缓释胶囊在Beagle犬体内具有相似的体内过程以及药代动力学特征,两者具有生物等效性。第二部分液质联用法测定大鼠尿液、粪便和胆汁中QO-58 lysine的含量及排泄动力学研究目的:建立QO-58 lysine在大鼠尿液、粪便和胆汁中的液质联用方法(LC-MS/MS),并对其进行排泄动力学研究。方法:1样品收集:以50 mg/kg的剂量灌胃给予QO-58 lysine后,采用代谢笼收集其0~4、4~8、8~12、12~24、24~36、36~48、48~60以及60~72 h的尿液与粪便样品。麻醉后对大鼠进行胆管插管,缝合后在清醒状态下收集0~4、4~8、8~12、12~16、16~20、20~24、24~28、28~32、32~36、36~40、40~48、48~52、52~56、56~60、60~64、64~68和68~72 h的胆汁样品。2样品的预处理:尿液和胆汁采用液液萃取法;粪便采用乙腈沉淀法。3检测条件:采用Phenomenex C18分析柱,乙腈(A)和2 mmol/L乙酸铵和0.2%(v/v)甲酸的水溶液(B)为流动相,流速为0.5 ml/min。采用电喷雾离子源、正离子模式、多反应监测进行检测,内标物(IS)为尼莫地平。被测成分的离子对分别为QO-58 lysine m/z 443.1→361.1,尼莫地平m/z 419.2→343.2。结果:1 QO-58 lysine在尿液、粪便和胆汁中的线性关系良好(r≥0.9943),日内精密度和日间精密度均符合要求,基质效应69.48%~99.57%,稳定性良好;2 72 h尿液的累计排泄率为(0.0245±0.0324)%,粪便的累计排泄率为(92.94±4.71)%,胆汁的累计排泄率为(2.05±0.68)%。结论:1本实验采用LC-MS/MS方法对大鼠的尿液、粪便和胆汁中QO-58lysine的含量进行测定,该方法简便快捷、特异性强、稳定性好、准确度高。经方法学研究表明,LC-MS/MS方法能够满足样品测定的要求。2 QO-58 lysine在灌胃给药后主要经过粪便排泄,一部分经过胆汁排泄,极少量通过尿液排泄。另外,约有7%的药物有待探明去向,可能是在肝脏等器官中产生了一些新的代谢产物。第三部分QO-58 lysine在大鼠体内的代谢研究目的:建立LC-MS/MS和HPLC-QTOF-MS的方法,分离筛选并且分析推测QO-58 lysine在大鼠尿液和胆汁中的代谢产物。方法:1采用Phenomenex C18分析柱,流动相为乙腈(A)和2 mmol/L乙酸铵和0.2%甲酸的水溶液(B),梯度洗脱,质谱采用电喷雾离子源。2大鼠灌胃给予QO-58 lysine 50 mg/kg,分别收集尿液和胆汁。采用液液萃取法对尿液和胆汁样品进行浓缩和处理。采用高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(HPLC-QTOF-MS)技术分析样品,正/负离子模式,全扫描采集。3数据采集完毕后,先使用“Metabolitepilot 1.5”中的“碎片和中性丢失亏损过滤(Fragment and Neutral loss defect filter)”功能对其中的代谢物进行初步的筛选;之后再使用“Peakview 2.2”中的“Masterview”功能,针对之前初步筛选的结果进行更进一步的分析,对比有关化合物的精确分子量、分子式、二级质谱图、保留时间及质谱信息,对其结构进行推测。最后根据代谢物结构推测其代谢途径。结果:根据生物体内药物的代谢转化的规律以及母体药物总结的裂解规律,在大鼠体内检测出11种代谢产物,其中I相代谢产物8种,II相代谢产物3种。并对各个代谢产物的代谢途径进行了解析。结论:1本实验总共检测到11种代谢产物。QO-58 lysine所检测到的I相代谢产物可以发生卤素原子的消除反应、羟基化和双羟基化反应;II相代谢物可以发生硫酸化、葡萄糖醛酸化反应以及与N-乙酰半胱氨酸的结合反应。2建立了基于HPLC-QTOF-MS技术的专属性好、准确度高、方便快捷的代谢物鉴定方法。
[Abstract]:A new type of KCNQ potassium channel openers ( QO - 58 lysine ) in Beagle dogs was used to study the biological equivalence of dexlansoprazole sustained - release capsules in Beagle dogs . The pharmacokinetic parameters ( AUC0 - t , AUC0 - 鈭，

本文编号：1787478