龙胆水提物通过FXR及其靶基因对胆汁淤积大鼠保护作用的机制研究

发布时间：2018-05-09 15:10

  本文选题：龙胆水提物 + 胆汁淤积　； 参考：《广州中医药大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的： 从胆汁酸自身反馈调节角度探讨龙胆水提物(The aqueous extract of Gentiana scabra Bge. a scabra Bge. a scabra Bge., GA)通过FXR及其靶基因(SHP、NTCP、MRP2、 BSEP和CYP7al)对α-萘异硫氰酸酯(α-naphthylisothiocyanate, ANIT)诱导的急性肝内胆汁淤积模型大鼠护肝利胆的作用及机制。 方法： 1.GA的急性毒性考察 将40只KM小鼠按体质量随机分为4组,即空白对照组、(48g/kg)GA高剂量组、(24g/kg)GA中剂量组、(12g/kg)GA低剂量组,每组10只,雌雄各半。按40mL/kg灌胃给药,给药4h后正常饲养,观察7d。 2.GA对正常大鼠的利胆作用研究 将40只SD大鼠按体质量随机分为4组,即：空白对照组、GA高剂量组、GA中剂量组、GA低剂量组,每组10只。空白对照组和GA高、中、低剂量组每日一次同一时间段内分别给予生理盐水和1.2g/kg、0.6g/kg和0.3g/kg GA灌服,连续给药7天。末次给药2h后,使用乌拉坦麻醉大鼠后行胆管插管手术,术后收集大鼠的胆汁和血液样品。通过对胆汁流速；胆汁内TBA、TBIL、GSH和DBIL的含量；血清内TBA、TBIL和DBIL的含量以及AST、和ALP的活性来评价GA对正常大鼠的影响 3.GA对ANIT诱导的急性肝内胆汁淤积鼠的保肝利胆作用及机制研究 将60只SD大鼠按体质量随机分为6组,即：模型对照组、模型组、模型+阳性药物熊去氧胆酸组(Ursodeoxycholic acid, UDCA)和模型+GA高、中、低剂量组,每组10只,连续给药7天。模型对照组和模型组的大鼠每日一次给予生理盐水灌服。在实验的第5天,模型组给予ANIT(100mg/kg)仅一次灌服诱导急性肝内胆汁淤积的模型,而模型对照组给予植物油一次对照处理,诱导处理2h后均按原剂量继续给药。阳性药物对照组每天给予灌服UDCA (60mg/kg),模型+GA高、中、低剂量组每天分别给予GA1.2g/kg、0.6g/kg和0.3g/kg灌服,在实验的第5天,模型+UDCA组和模型+GA低、中、高剂量组分别给予ANIT(100mg/kg)仅一次灌服诱导急性肝内胆汁淤积的模型,诱导处理2h后均按原剂量继续给药。在实验的第7天(ANIT诱导造模48h后),使用乌拉坦麻醉大鼠后行胆管插管手术,术后收集大鼠的胆汁,血液和肝组织样品。通过对胆汁流速；胆汁内TBA、TBIL、GSH和DBIL的含量；血清内TBA、TBIL和DBIL的含量以及AST、ALT和ALP的活性；肝组织形态学；肝组织中法尼醇受体(Farnesoid X receptor, FXR)、小异源二聚体伴侣(Small heterodimer partner, SHP)、胆固醇7a羟化酶(Cholesterol7a-hydroxylase, CYP7al)、多药耐药相关蛋白2(Multidrug resistance-associated protein2, MRP2)、胆盐输出泵(Bile salt export pump, BSEP)和钠-牛磺胆酸共转运蛋白(Na+/taurocholate cotransporting peptide, NTCP)的mRNA的表达；以及肝脏中BSEP和MRP2蛋白的表达来对各组实验大鼠进行评价对比。 结果： 1.4组小鼠均存活。空白对照组和低剂量组的大鼠给药后精神、食欲、活动无异常；中、高剂量组的大鼠给药后精神恍惚、行动迟缓,4h后恢复正常。 2.与空白对照组比较,GA处理组加快了胆汁的流速(P0.05)。与空白对照组比较,GA处理组血清内TBA、TBIL和DBIL的含量以及AST、ALT和ALP的活性无明显影响改变(P0.05)。 3.与模型对照组比较,模型组的胆汁流速明显减缓(P0.05)且胆汁中GSH、TBIL、DBIL和TBA的含量升高(P0.05)；血清中TBIL、DBIL和TBA的含量以及AST、ALP和ALT的活性显著升高(P0.05)；在肝组织切片内可见肝细胞变性和坏死,中性粒细胞浸润；在分子和蛋白表达方面,肝组织中的NTCP和CYP7a1的mRNA表达虽略有降低,但无统计学意义(P0.05),FXR、MRP2、BSEP和SHP的mRNA表达虽稍见升高,但无统计学意义(P0.05),BSEP和MRP2蛋白变化与mRNA表达一致,均无统计学意义(P0.05)。与模型对照组比较,GA处理组的胆汁流速明显的加快(P0.05);胆汁中GSH、TBIL、DBIL和TBA的含量升高(P0.05)；血清中的TBIL、DBIL和TBA的含量以及ALT、 AST和ALP的活性显著降低(P0.05)；肝组织的病理形态显著改善；在分子和蛋白表达方面,肝脏中FXR、SHP、BSEP和MRP2的mRNA表达升高(P0.005),NTCP和CYP7al的mRNA表达降低(P0.05),BSEP和MRP2蛋白变化与mRNA表达一致(P0.05)。 结论： 1.GA对小鼠没有明显的急性毒性。 2.GA能促进大鼠胆汁的分泌及代谢,对肝功能没有明显的影响。 3.GA能缓解ANIT导致的胆汁异常蓄积和返流入血的病变,从而减少黄疸,改善肝功能；GA药源性的刺激FXR表达的上调,表达增强的FXR通过SHP反馈性抑制胆汁酸合成酶CYP7al的表达,减少胆汁酸的合成,激活肝细胞膜上BSEP和MRP2的转录,加速胆汁酸从肝细胞向胆小管的外排转运：下调NTCP的表达,减少胆汁酸的摄入。这可能是GA通过FXR调控胆汁酸的合成和代谢利胆护肝的作用机制之一。
[Abstract]:Objective:
The aqueous extract of Gentiana scabra Bge. a scabra Bge. a scabra, the acute intrahepatic cholestasis model induced by alpha naphthyl isothiocyanate (alpha naphthyl cyanate) in rats was studied from the angle of self feedback regulation of bile acids. The function and mechanism of the bile.
Method锛，

本文编号：1866498