辣椒素对慢性应激大鼠胃动力的作用及机制的研究

发布时间：2018-05-10 07:50

  本文选题：辣椒素 + 胃动力　； 参考：《西南医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:通过研究不同剂量、不同作用时间的辣椒素(Capsaicin,Cap)对慢性应激性(Chronic unpredictable mild stress,CUMS)大鼠胃酚红排空率的影响,并检测胃窦组织的及脑组织辣椒素受体(transient receptor potential vanilloid subtype 1,TRPV1)、降钙素基因相关肽(Calcitonin gene related peptide,CGRP)、神经降压素(Neurotensin,NT)的表达以及血清胃动素(motilin,MTL)水平,探讨Cap对慢性应激大鼠胃动力的作用及机制。方法:(1)实验动物及分组:SD大鼠120只,随机抽取20只作为正常对照组(A组),SD大鼠100只建立CUMS模型。造模成功后,将其随机分为空白对照组(B组)、溶剂对照组(C组)、Cap 0.04mg/kg组(D组)、Cap 0.4mg/kg组(E组)、Cap 4mg/kg组(F组),每组各20只。为了探索不同时期Cap对CUMS大鼠胃动力的影响,将实验分为I期、II期,I期为1周,II期为2周。按相应时期,A组、B组、C组、D组、E组、F组随机分为2个小组,即I期分为A1组、B1组、C1组、D1组、E1组、F1组(Cap 1周),II期分为A2组、B2组、C2组、D2组、E2组、F2组(Cap 2周),每组SD大鼠10只。(2)CUMS模型的建立:SD大鼠20只,随机分成正常组、模型组各10只。正常组自由进食进水,连续3w。模型组每天随机安排一种刺激,包括:禁水、禁食、夹尾、水平摇晃、冰水游泳、热水游泳、转换昼夜节律、制动、潮湿垫料,相邻2d的刺激不重复,每种刺激重复2-3次,连续3w。(3)Cap制剂的配制:称取cap100mg(98.37%的cap粉末101.66mg)、cap10mg(98.37%的cap粉末10.17mg)、cap1mg(98.37%的cap粉末1.02mg),分别加入含1ml吐温80的生理盐水99ml中混匀后,配成浓度为1mg/ml、0.1mg/ml、0.01mg/ml的cap制剂。对照溶剂:1ml吐温80加入99ml生理盐水中混匀配成溶剂。(4)cap干预实验方法:造模完成后,每日给予各组大鼠不同溶液,a组无处理,b组蒸馏水灌胃,c组给予对照溶剂灌胃,d组cap0.04mg/kg灌胃,e组cap0.4mg/kg灌胃、f组cap4mg/kg灌胃,给药后所有大鼠常规喂养,各组大鼠按分期喂养后,所有大鼠禁食24h,于翌日晨给予浓度为50mg/dl的酚红溶液2ml/鼠灌胃,30min后麻醉处死大鼠。(5)检测指标:(1)收集胃内容物,测定胃酚红排空率。(2)心脏取血2ml,4℃离心后提取上清液,用elisa法检测血浆mtl水平。(3)显微镜下观察大鼠胃粘膜损伤情况并进行病理组织学评分。(4)取胃窦、脑组织后分别用elisa和免疫组化方法检测trpv1、cgrp、nt的表达。结果:1、模型验证:(1)动物一般情况:正常组大鼠一般状况良好,活动灵敏,进食进水正常,大小便正常;cums模型组大鼠精神状态较差,消瘦萎靡,倦怠懒动,毛发污浊,进食进水减少,大便干结量少。(2)胃酚红排空率:正常组与cums模型组胃酚红排空率分别为80.36%±3.27%、65.83%±3.90%,cums模型组的胃酚红排空率显著低于正常组(p0.05),造模成功。2.cap干预的结果:(1)动物一般情况:实验过程中各组大鼠无死亡,其中a1组、a2组大鼠一般状况良好,活动灵敏,进食进水正常,大小便正常;b1组、c1组、b2组、c2组大鼠精神状态较差,消瘦萎靡,倦怠懒动,毛发污浊,进食进水减少,大便干结量少。d1组、e1组、f1组大鼠一般精神状态较差,消瘦萎靡,倦怠懒动,毛发污浊,进食进水减少,大便干结量少。d2组大鼠一般状况稍好,活动稍迟缓,消瘦,进食进水正常,大小便正常。e2组大鼠一般状况稍好,活动稍迟缓,消瘦,进食进水正常,大小便正常。f2组一般状况欠佳,活动迟缓,消瘦,进食进水正常,大小便正常。(2)大鼠胃酚红排空率:a1组、b1组、c1组、d1组、e1组、f1组分别为79.54%±2.98%、69.37%±4.21%、68.15%±3.67%、65.58%±7.50%、66.58%±5.31%、62.52%±5.34%;a2组、b2组、c2组、d2组、e2组、f2组分别为78.61%±4.04%、67.14%±3.44%、66.95%±3.93%、92.68%±2.31%、86.24%±2.75%、79.53%±2.24%。其中在i期实验中,a1组胃酚红排空率显著高于该期其余各组(p0.05),其余各组相比较差异无统计学意义(p0.05)。在ii期实验中,d2组、e2组、f2组胃酚红排空率显著高于b2组、c2组(p0.05),且d2组胃酚红排空率显著高于e2组(p0.05),e2组胃酚红排空率显著高于f2组(p0.05)。在相同cap剂量下d2组显著高于d1组(p0.05),e2组显著高于e1组(p0.05),f2组显著高于f1组(p0.05)。(3)elisa法检测结果:(1)胃窦组织trpv1表达结果:a1组、b1组、c1组、d1组、e1组、f1组分别为63.62±9.45pg/ml、269.38±11.07pg/ml、274.67±10.92pg/ml、138.16±12.10pg/ml、147.60±15.18pg/ml、150.62±11.95pg/ml,a2组、b2组、c2组、d2组、e2组、f2组分别为59.42±7.05pg/ml、273.06±13.98pg/ml、271.57±11.59pg/ml、73.89±6.53pg/ml、99.50±5.94pg/ml、130.44±7.63pg/ml。其中在i期中,a1组显著低于其余各组(p0.05),d1组、e1组、f1组显著低于b1组、c1组(p0.05),而d1组、e1组、f1组之间相比较差异无统计学意义(p0.05)。在ii期中,a2组显著低于其余各组(p0.05),d2组、e2组、f2组显著低于b2组、c2组(p0.05),且d2组显著低于e2组(p0.05),e2组显著低于f2组(p0.05)。在相同cap剂量下d1组显著高于d2组(p0.05),e1组显著高于e2组(p0.05),f1组显著高于f2组(p0.05)。(2)下丘脑组织trpv1表达结果:a1组、b1组、c1组、d1组、e1组、f1组分别为61.67±6.74pg/ml、284.06±6.88pg/ml、288.01±9.76pg/ml、154.48±8.53pg/ml、159.48±10.14pg/ml、151.77+13.25pg/ml,a2组、b2组、c2组、d2组、e2组、f2组分别为64.20±6.14pg/ml、284.50±5.45pg/ml、285.71±8.48pg/ml、78.52±6.31pg/ml、108.21±4.27pg/ml、132.26±4.19pg/ml。其中在i期,a1组显著低于其余各组(p0.05),d1组、e1组、f1组显著低于b1组、c1组(p0.05),而d1组、e1组、f1组之间相比较差异无统计学意义(p0.05)。在ii期中,a2组显著低于其余各组(p0.05),d2组、e2组、f2组显著低于b2组、c2组(p0.05),且d2组显著低于e2组(p0.05),e2组显著低于f2组(p0.05)。在相同cap剂量下d1组显著高于d2组(p0.05),e1组显著高于e2组(p0.05),f1组显著高于f2组(p0.05)。(3)胃窦组织cgrp表达结果:a1组、b1组、c1组、d1组、e1组、f1组分别为80.16±7.43pg/ml、218.66±10.24pg/ml、224.13±11.60pg/ml、110.37±8.90pg/ml、164.97±14.52pg/ml、197.67±10.04pg/ml,a2组、b2组、c2组、d2组、e2组、f2组分别为84.01±6.58pg/ml、220.79±9.71pg/ml、223.04±12.01pg/ml、110.79±8.74pg/ml、143.21±9.20pg/ml、182.93±9.31pg/ml。其中在i期,a1组显著低于其余各组(p0.05),d1组、e1组、f1组显著低于b1组、c1组(p0.05),且d1组显著低于e1组(p0.05),e1组显著低于f1组(p0.05)。在ii期中,a2组显著低于其余各组(p0.05),d2组、e2组、f2组显著低于b2组、c2组(p0.05),且d2组显著低于e2组(p0.05),e2组显著低于f2组(p0.05)。在相同cap剂量下e1组显著高于e2组(p0.05),f1组显著高于f2组(p0.05)。(4)下丘脑组织cgrp表达结果:a1组、b1组、c1组、d1组、e1组、f1组分别为78.14±9.34pg/ml、219.64±9.28pg/ml、227.55±6.56pg/ml、109.88±7.29pg/ml、174.64±8.23pg/ml、206.78±6.81pg/ml,a2组、b2组、c2组、d2组、e2组、f2组分别为82.69±7.22pg/ml、224.64±9.66pg/ml、232.55±4.97pg/ml、106.07±8.42pg/ml、156.79±5.39pg/ml、176.41±8.60pg/ml。在i期中,a1组显著低于其余各组(p0.05),d1组、e1组、f1组显著低于b1组、c1组(p0.05),且d1组显著低于e1组(p0.05),e1组显著低于f1组(p0.05)。在ii期中,a2组显著低于其余各组(p0.05),d2组、e2组、f2组显著低于b2组、c2组(p0.05),且d2组显著低于e2组(p0.05),e2组显著低于f2组(p0.05)。在相同cap剂量下e1组显著高于e2组(p0.05),f1组显著高于f2组(p0.05)。(5)胃窦组织nt表达结果:a1组、b1组、c1组、d1组、e1组、f1组分别为78.35±7.73pg/ml、247.40±8.25pg/ml、256.21±9.36pg/ml、108.72±10.18pg/ml、146.03±12.65pg/ml、170.56±8.08pg/ml,a2组、b2组、c2组、d2组、e2组、f2组分别为82.08±8.09pg/ml、243.80±6.44pg/ml、251.41±7.33pg/ml、107.93±8.43pg/ml、136.13±7.73pg/ml、174.40±7.04pg/ml。在i期中,a1组显著低于其余各组(p0.05),d1组、e1组、f1组显著低于b1组、c1组(p0.05),且d1组显著低于e1组(p0.05),e1组显著低于f1组(p0.05)。在ii期中,a2组显著低于其余各组(p0.05),d2组、e2组、f2组显著低于b2组、c2组(p0.05),且d2组显著低于e2组(p0.05),e2组显著低于f2组(p0.05)。(6)下丘脑组织nt表达结果:a1组、b1组、c1组、d1组、e1组、f1组分别为91.59±7.79pg/ml、258.62±6.42pg/ml、261.42±8.08pg/ml、107.29±4.73pg/ml、134.40±8.74pg/ml、183.06±6.11pg/ml,a2组、b2组、c2组、d2组、e2组、f2组分别为91.09±6.28pg/ml、262.89±6.37pg/ml、264.68±7.38pg/ml、111.38±2.94pg/ml、146.48±4.19pg/ml、190.67±3.75pg/ml。在i期a1组显著低于其余各组(p0.05),d1组、e1组、f1组显著低于b1组、c1组(p0.05),且d1组显著低于e1组(p0.05),e1组显著低于f1组(p0.05)。在ii期中a2组显著低于其余各组(p0.05),d2组、e2组、f2组显著低于b2组、c2组(p0.05),且d2组显著低于e2组(p0.05),e2组显著低于f2组(p0.05)。(4)大鼠血浆mtl水平:a1组、b1组、c1组、d1组、e1组、f1组分别为169.44±8.07pg/ml、71.73±8.54pg/ml、73.30±9.67pg/ml、115.46±9.96pg/ml、114.64±10.61pg/ml、105.27±9.23pg/ml,a2组、b2组、c2组、d2组、e2组、f2组分别为172.68±7.49pg/ml、75.48±10.03pg/ml、69.22±8.92pg/ml、152.93±5.66pg/ml、135.67±11.92pg/ml、130.34±12.84pg/ml。在i期实验中,a1组mtl水平明显高于其余各组(p0.05),d1组、e1组、f1组均高于b1组、c1组(p0.05),且d1组、e1组mtl水平明显高于f1组(p0.05),而d1组与e1组相比较差异无统计学意义(p0.05)。在ii期实验中,a2组mtl水平明显高于其余各组(P0.05),D2组、E2组、F2组均高于B2组、C2组(P0.05),且D2组MTL显著高于E2组(P0.05),E2与F2组相比较差异无统计学意义(P0.05)。在相同Cap剂量下D1组显著低于D2组(P0.05),E1组显著低于E2组(P0.05),F1组显著低于F2组(P0.05)。(5)胃粘膜病理组织学检查:胃粘膜病理组织损伤积分(Masuda标准方法)A1组、B1组、C1组、D1组、E1组、F1组分别为0.5±0.71、4.7±1.50、4.3±1.33、4.2±1.03、3.8±0.92、4.0±1.41,A2组、B2组、C2组、D2组、E2组、F2组分别为0.3±0.48、4.1±1.45、4.5±1.35、2.1±0.74、2.5±0.85、2.4±0.84。在I期实验中,A1组显著低于其余各组(P0.05),其余各组之间相比较差异无统计学意义(P0.05)。在II期实验中,A2组显著低于其余各组。D2组、E2组、F2组显著低于B2、C2组(P0.05),D2组、E2组、F2组之间相比较差异无统计学意义(P0.05)。而在相同Cap剂量下,D1组显著高于D2组(P0.05),E1组显著高于E2组(P0.05),F1组显著高于F2组(P0.05)。结论:1)CUMS能成功建立大鼠胃动力障碍模型,且能上调TRPV1的表达。(2)CUMS大鼠摄入0.04mg/(kg·d)-4mg/(kg·d)Cap 1周对其胃动力无促进作用。(3)CUMS大鼠摄入0.04mg/(kg·d)-4mg/(kg·d)Cap 2周对其胃动力有明显促进作用,以0.04mg/(kg·d)效果最佳。(4)短期(1周及2周)摄入不同剂量Cap可使CUMS大鼠上调的TRPV1表达下移,并调节CGRP、NT脑肠肽的表达,促进MTL的释放。(5)CUMS大鼠摄入0.04mg/(kg·d)-4mg/(kg·d)Cap对胃粘膜有保护作用。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R57

【参考文献】

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