基于HMGB1探讨HBOA抗肝纤维化的作用机制

发布时间：2018-05-12 02:44

  本文选题：高迁移率族蛋白B1 + 老鼠|生物碱A　； 参考：《广西医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:复制大鼠四氯化碳肝纤维化模型,测定血清中高迁移率族蛋B1(HMGBl)与肝纤维化大鼠相关指标的含量并验证其关系,观察HMGBl对其胞外受体—Toll-4样受体(TLR4)的激活作用,通过相关信号通路探索HMGBl在肝纤维化形成中的作用,从而探讨老鼠|生物碱A(HBOA)抗肝纤维化的作用机制。方法:1复制大鼠肝纤维化模型及药物干预取60只Sprague Dawley(SD)雄性大鼠随机分为肝纤维化模型组(n=50)及正常对照组(n=10)。肝纤维化模型组大鼠灌胃予以40%CCl_4橄榄油溶液3 m L·kg-1复制肝纤维化模型,首剂加倍,每周2次,共12周,正常对照组大鼠仅灌胃相应体积生理盐水。第8周,随机取部分大鼠作病理检测,确定模型成功后将肝纤维化模型组大鼠随机分为模型对照组(MC)、秋水仙碱组(Colchicine,0.4 mg·kg-1)、HBOA高剂量组(HBOA-H,100 mg·kg-1)、HBOA低剂量组(HBOA-L,50 mg·kg-1),每组各10只。从第9周始,分别灌胃给予相应的药物,模型对照组及正常对照组(NC)灌胃给予相等体积的0.6%CMC-Na溶液10 m L·kg-1,每天1次,连续4周。2测定大鼠血清学指标于末次给药24小时后,麻醉、称重并腹主动脉抽血,离心取上清液。检测肝功能指标谷丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(T-BIL)的活性;测定氧化应激物超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)含量;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中炎症因子HMGB1、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α);肝纤维化四项因子透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、IV型胶原(Col-IV)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ);作HMGB1与其他指标的相关回归分析。3大鼠肝组织病理及分子生物学检测大鼠处死后,取完整肝脏,电子天平精密称重并计算大鼠肝指数,剪取相同部位肝左叶制作肝组织病理学切片,作常规HE、Masson染色,光镜下观察其病理变化并计算肝脏病理分级及评分;采用免疫组织化学法检测HMGB1、TLR4、肌动蛋白α(α-SMA)蛋白的表达;RT-PCR法检测大鼠肝组织HMGB1、TLR4、骨髓样分化因子88(My D88)、核因子kappa B(NF-κB)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的m RNA表达。结果:1 HBOA对CCl_4性肝纤维化大鼠相关指标的作用8周后即成功复制CCl_4性大鼠肝纤维化模型,连续给药4周后发现,与模型对照组比较,HBOA可降低CCl_4性肝纤维化大鼠血清中的ALT、AST及T-BIL(P�d0.01),升高SOD、GSH-Px含量并降低MDA(P0.01),降低炎症因子HMGB1、IL-1β、IL-6、TNF-α水平(P0.01),同时下调血清中的HA、LN、Col-IV、PCⅢ水平(P0.01);且血清中HMGB1水平与其他因子呈显著正相关;HE及Masson病理结果显示,HBOA显著减轻CCl_4所致肝组织病变程度。2 HBOA抑制HMGB1在TLR4信号通路中的表达免疫组织化学法测定结果显示,与正常对照组比较,模型对照组肝组织中HMGB1、TLR4、α-SMA蛋白的表达明显升高(P0.01);与模型对照组比较,HBOA高、低剂量组均显著降低肝组织中的HMGB1、TLR4、α-SMA蛋白的表达(P0.01)。RT-PCR检测结果可见,与正常对照组比较,模型对照组大鼠肝组织中HMGB1、TLR4、My D88、NF-κB、TGF-β1的m RNA表达明显升高(P0.01);与模型对照组比较,HBOA高、低剂量组均显著降低肝组织中HMGB1、TLR4、My D88、NF-κB、TGF-β1的m RNA表达(P0.01)。结论:HBOA对CCl_4性大鼠肝纤维化有一定的治疗作用,其作用机制可能与降低晚期致炎因子HMGB1的表达并抑制其信号通路TLR4-My D88-NF-κB有关。
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本文编号：1876804