吡格列酮对糖尿病肾组织nephrin表达的影响

发布时间：2018-05-27 06:18

本文选题：吡格列酮 + 糖尿病肾病　；参考：《安徽医科大学》2016年博士论文

【摘要】：目的:1.研究不同剂量盐酸吡格列酮(PIO)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾组织nephrin表达水平的影响;2.进一步观察PIO对2型糖尿病患者尿nephrin排泄的影响,了解PIO保护糖尿病肾损害的作用并探讨其机制。方法:1.动物实验部分:将健康清洁级雄性大鼠(n=50)随机分为正常对照组(NC组)和实验组。NC组8只,实验组42只。一次性腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)65 mg/kg建立糖尿病大鼠模型,48-72 h后空腹采大鼠尾外周血,血糖≥16.7mmol/L并出现多尿多饮等表现者即造模成功。造模成功的实验组随机分为4组:糖尿病模型对照组(DM组,n=8)和3组PIO干预组(分别为DR1,DR2,DR3组,PIO干预剂量分别为:10、20、30 mg/kg/d,各组n=8)。造模成功后第7天即0周,于0,4,8周末测大鼠尾外周血血糖,收集大鼠尿液,测定尿白蛋白(UAlb)、尿肌酐(UCr)和尿nephrin(Unep)水平。实验中定期监测大鼠血糖,8周末麻醉大鼠后从腹主动脉取血,测空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、糖化血红蛋白A1c(HbA1c)、血肌酐(Cr)及尿素氮(BUN)水平。处死大鼠留取左侧肾脏,计算肾脏肥大指数(KI),观察肾脏病理变化,计算肾小球平均体积(MGV)、平均肾小球截面积(MGA)、肾小球基底膜厚度(GBMT)及足突融合率(FPFR)。应用免疫组化和逆转录聚合酶链反应检测肾组织nephrin蛋白含量及mRNA水平。2.临床试验部分:2012年9月至2014年9月在合肥市第二人民医院内分泌科住院和门诊的糖尿病患者114例,纳入标准:所有糖尿病患者符合1999年WHO糖尿病的诊断标准,已口服二甲双胍和/或a糖苷酶抑制剂降糖,但血糖控制不佳(静脉空腹血糖在7-10mmol/L),根据尿白蛋白/肌酐比值分3组:(1)正常白蛋白尿组(DM组,n=25例),尿ACR30mg/g;(2)微量白蛋白尿组(DN1组,n=61例),30mg/g≤ACR300mg/g;(3)大量白蛋白尿组(DN2组,n=28例),ACR≥300mg/g。同期选择在我院体检中心健康体检人群30例为健康对照组(NC组),对照组空腹静脉血糖均小于5.6mmol/L。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测所有入选者尿中nephrin表达水平。同时将微量白蛋白尿组(dn1组)61例患者随机分成两组:对照组(a组=29例,在原有口服降糖药物二甲双胍和/或a糖苷酶抑制剂的基础上加用磺脲类药物)、吡格列酮组(b组=32例,在原有口服降糖方案二甲双胍和/或a糖苷酶抑制剂基础上加用吡格列酮15-30mg/日),连续口服12周,分别于治疗前及治疗后测定尿nephrin、尿白蛋白及尿肌酐水平。结果1.动物实验部分:(1)stz诱导的4组糖尿病大鼠(dm组、dr1、dr2和dr3组)的外周血血糖和8周末hba1c水平与nc组相比显著升高,具有统计学差异(p0.01);而4组糖尿病大鼠各组间上述指标无统计学差异(p0.05);8周末各pio干预组tg均明显低于dm组(p0.05),dr2、dr3组hdl-c水平明显高于dm组(p0.05)。(2)0周时各组(nc组、dm组、dr1、dr2和dr3组)间尿白蛋白肌酐比(uacr)水平无统计学差异;8周末时,4组糖尿病大鼠uacr均显著高于nc组(p0.01),pio干预组各组uacr均明显低于dm组(p0.01),且dr2,dr3两组uacr均低于dr1组(p0.05)。(3)与nc组相比,8周末各糖尿病组电镜下见到肾小球毛细血管基底膜模糊不清,有不规则性增厚,且有足突破坏及融合,基底膜厚度(gbmt)及足突融合率(fpfr)均显著高于nc组(p0.01);各pio干预组gbmt和fpfr均显著高于nc组(p0.05和p0.01),却显著低于dm组(p0.01);且dr2及dr3组gbmt和fpfr明显低于dr1组(均p0.01)。(4)与nc组相比,8周末4组糖尿病组大鼠的ki、mgv和mga均显著高于nc组(p0.01)。与dm组相比,pio各干预组(dr1组、dr2和dr3组)的ki和mga均明显降低(p0.05),且pio干预组三组间相比较,dr2组、dr3组的ki和mga明显低于dr1组(p0.05);dr1组的mgv略低于dm组,无统计学意义差异(p0.05),而dr2、dr3组与dm组相比,mgv明显降低,差异有统计学意义(p0.01)。(5)8周末,各pio干预组尿nephrin肌酐比(uner)排泄均显著低于dm组(p0.05),dr2和dr3组uner较dr1组显著降低(p0.05),而dr2和dr3组两组间差异不明显(P0.05)。(6)8周末,免疫组化结果显示肾脏nephrin蛋白IOD值:NC组各PIO组DM组(P0.05),各PIO干预组间IOD无统计学差异;RT-PCR结果显示与NC组比较,DM组及PIO干预组nephrin mRNA水平均明显增高(P0.05),且PIO干预组低于DM组(P0.05)),但各PIO干预组间无明显差异。(7)相关性分析显示UNER与UACR和KI呈显著正相关(r值分别为0.881和0.833,P0.01)。2.临床试验部分:(1)糖尿病组患者尿液中均可检测到nephrin,而NC组患者尿中未检测到nephrin排泄。DN组患者仅检测到微量nephrin排泄,DN2组(大量白蛋白尿组)尿nephrin/尿肌酐比值(UNER)显著高于DN1组(微量白蛋白尿组)(P0.01)。(2)A组和B组糖尿病患者治疗前一般临床资料(年龄、BMI、WHR、FBG、SBP、DBP、HbAlc)比较,均无统计学差异(P0.05);治疗后A组和B组的FBG、HbAlc较治疗前明显降低(P0.01),两组间相比较差异无统计学意义(P0.05)。(3)A组治疗前后UNER及UACR均无明显变化(p0.05);B组治疗后UNER及UACR均较治疗前下降,差异有统计学意义(P0.05)。(4)相关性分析显示尿UNER与UACR呈正显著相关(r=0.624,P0.01)。结论:(1)糖尿病状态下肾组织nephrin表达,尿nephrin排泄增加。(2)吡格列酮可改善STZ诱导的糖尿病大鼠肾组织nephrin mRNA及蛋白表达,降低尿nephrin排泄,且不依赖于降血糖作用。(3)吡格列酮对STZ诱导的糖尿病大鼠足细胞的有一定保护作用,并具有一定的剂量依赖性,该作用其可能与抑制尿nephrin排泄、调节肾组织nephrin mRNA及蛋白表达水平有关。(4)2型糖尿病患者尿nephrin排泄明显增加,且与尿白蛋白排泄增加有关,吡格列酮可通过降低2型糖尿病患者尿nephrin的排泄而发挥直接的肾脏保护作用。
[Abstract]:Objective : 1 . To study the effects of different doses of pioglitazone on the expression of nephrin in diabetic rats induced by streptozocin . Methods : 1 . The experimental group of rats was divided into 4 groups randomly : control group ( NC group ) and experimental group ( n = 8 ) . The levels of nephrin protein and urinary nephrin ( BUN ) were measured at 0 , 4 and 8 weeks after the success of the model . In the experiment , the blood glucose of rats was measured and the levels of urinary albumin ( UALB ) , urinary creatinine ( UCr ) and urine nephrin ( BUN ) were measured . There was no significant difference in the levels of nephrin mRNA ( P < 0.05 ) between group A and group B ( P < 0.05 ) . The results showed that the ratio of urinary nephrin / urine creatinine ( UNER ) was significantly higher in diabetic group than in group B ( P 0.01 ) . Conclusion : ( 1 ) In diabetic rats , nephrin expression and nephrin excretion increase .
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R692.9

【参考文献】