泄浊解毒、活血通络方对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及对乙酰肝素酶影响的实验研究

发布时间：2018-05-28 16:56

  本文选题：糖尿病肾病 + 泄浊解毒　； 参考：《河北医科大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的：本研究通过高糖高脂饲料联合STZ复制糖尿病大鼠动物模型，并应用泄浊解毒、活血通络方对模型进行干预性治疗，通过观察大鼠的生化指标以及肾组织Hpa的表达，探讨泄浊解毒、活血通络方对糖尿病肾病的治疗作用及其可能机制，从而为临床上治疗糖尿病肾病提供实验基础和理论依据。 方法：选用健康雄性Sprague-Dauley大鼠85只，普通饲料适应性喂养一周后，分别检测血糖和尿蛋白均为阴性者用于实验。随机分为正常组(NG)15只，造模组70只。正常组给予普通饲料，造模组给予高糖高脂饲料。12周后，造模组大鼠禁食不禁水，一次性腹腔注射STZ(35mg/kg)。正常组大鼠注射相应体积的枸橼酸缓冲液。72h后尾静脉取血测随机血糖，血糖≥16.7mmol/L为DM造模成功。造模过程中死亡两只，另有一只血糖未达标，均予以剔除。将成模大鼠随机分为模型组(MG)，中药组(ZG)，西药（厄贝沙坦）组(XG),加方组（中药联合厄贝沙坦）组(JG)。各治疗组给予相应药物灌胃，正常组及模型组灌服相当量的生理盐水，各组共给药16周。分别于给药第4周、第8周、第12周监测体重、血糖和尿蛋白。灌胃后第16周末，禁食12h后，留取各组大鼠24小时尿液，测定24小时尿蛋白定量。麻醉状态下腹主动脉取血，分离血清，测定各生化指标并留取肾组织进行光镜、电镜、免疫组化、Real-timePCR检测。 结果： 1实验大鼠的一般状况 正常组大鼠饮食正常，尿量正常，肌肉丰满，毛色光泽，反应灵敏。其余各组大鼠在注射STZ后逐渐出现多饮、多食、多尿症状，实验最后一周，与正常组相比，造模组及各给药组大鼠反应迟钝，精神萎靡，体型偏小，模型组大鼠的症状比各给药组大鼠的症状严重,中药组和西药组大鼠的症状比加方组的症状严重。在实验过程中，不同阶段均有大鼠死亡情况。注射STZ后72小时之内，2只大鼠死亡，1只大鼠血糖未达标准，原因可能与大鼠个体差异和操作有关，予以剔除。给药期间模型组死亡4只，中药组死亡1只，西药组死亡2只，，死亡原因可能是由于糖代谢障碍所致血糖过高最终导致多脏器衰竭。中药组2只，西药组1只，加方组1只血糖缓解予以剔除。 2各组大鼠体重、右肾重、肥大指数（右肾重/体重）的比较 与正常组相比，模型组和各治疗组的体重明显减轻（P0.05），模型组与各治疗组及各治疗组之间体重无明显的差异（P0.05）；右肾重各组之间无显著性差异（P0.05）；与正常组相比，模型组和各治疗组的肥大指数明显偏高（P0.05），模型组与各治疗组及各治疗组之间无显著性差异（P0.05）。 3各组大鼠糖化血红蛋白的比较 与正常组相比，模型组及各治疗组糖化血红蛋白明显升高（P0.05），加方组和中药组低于西药组和模型组（P0.05），加方组和中药组之间无明显差异（P0.05），模型组和西药组之间无明显差异（P0.05）。 4各组大鼠24h尿蛋白定量 各治疗组24小时尿蛋白定量水平与正常组及模型组相比均有明显差异（P0.05），比正常组明显升高，比模型组明显降低；各治疗组之间比较，加方组24小时尿蛋白定量低于中药组和西药组（P0.05）；西药组和中药组之间没有明显差异（P0.05）。 5各组大鼠血清总蛋白和白蛋白的比较 各治疗组血清总蛋白和白蛋白水平与正常组及模型组相比均有明显差异（P0.05），比正常组降低，比模型组升高；各治疗组之间比较，加方组血清总蛋白和白蛋白高于中药组和西药组（P0.05）；西药组和中药组之间没有明显差异（P0.05）。 6各组大鼠肾功能的比较 正常组、模型组和各治疗组大鼠之间血清肌酐和尿素氮水平无明显差异（P0.05）。 7各组大鼠血脂的比较 与正常组相比，模型组和各治疗组大鼠胆固醇和甘油三酯水平比正常组大鼠明显增高(P0.05)，与模型组相比，各治疗组胆固醇和甘油三酯水平显著下降(P0.05)；各治疗组之间相比，加方组胆固醇和甘油三酯水平均低于中药组和西药组（P0.05）；西药组和中药组之间相比没有明显差异（P0.05）。 8肾脏病理形态学观察 8.1光镜观察 正常组大鼠肾组织结构正常，肾小球结构完整清晰，未见明显肥大，肾小球毛细血管基底膜正常无增厚，系膜及其基质无明显改变。模型组大鼠可见肾小球明显肥大，肾小球毛细血管基底膜明显增厚。各治疗组间比较，加方组病理表现略轻于中药组和西药组，中药组和西药组之间无明显区别。 8.2电镜观察 正常组大鼠肾组织结构清晰正常，肾小球毛细血管基底膜均匀,未见增厚，足突分布均匀，未见融合及缺失；模型组大鼠可见肾小球基底膜显著增厚，厚薄不均匀，外突呈丘状，足突广泛融合，血管内皮细胞高度增生。各治疗组均有不同程度的病理改变。 8.3Real-Time PCR 与正常组相比，造模组大鼠肾组织中Hpa表达量明显增加（P0.05）；与模型组相比，各治疗组Hpa的表达量明显减弱（P0.05）；治疗各组间比较，加方组Hpa的表达量少于中药组和西药组（P0.05），中药组和西药组无显著差异（P0.05）。 8.4免疫组化 正常组未见Hpa阳性染色的明显表达，或者少量表达；与正常组相比，造模组大鼠肾小球中Hpa表达量明显增加（P0.05）；与模型组相比，各治疗组Hpa的表达量明显减弱（P0.05）；治疗各组间比较，加方组Hpa的表达量少于中药组和西药组（P0.05），中药组和西药组相比无显著差异（P0.05）。 结论： 1泄浊解毒、活血通络中药可降低DN大鼠的HbA1c、TC、TG，减少尿蛋白的排泄，提高TP和ALB,改善糖尿病肾病大鼠肾脏病理损害，延缓DN的进展。 2泄浊解毒、活血通络中药能够降低Hpa表达，延缓DN进展，从而达到对DN大鼠肾脏保护作用。 3实验结果提示，中药组和西药组治疗效果相当，加方组的治疗效果优于单用中药和单用西药组，对临床应用具有指导意义。
[Abstract]:Objective: in this study, the animal model of diabetic rats was replicated by high glucose and high fat diet combined with STZ, and the treatment of the model was used to treat the model with relieving turbidity and detoxification and activating blood circulation and collaterals. By observing the biochemical indexes of the rats and the expression of Hpa in the kidney tissue, the therapeutic effect and possible mechanism of the recipe for relieving turbidity and detoxification and activating blood circulation and collaterals on diabetic nephropathy were discussed. So as to provide experimental basis and theoretical basis for clinical treatment of diabetic nephropathy.
Methods: 85 healthy male Sprague-Dauley rats were selected and the normal diet was fed for one week. The blood sugar and urine protein were tested respectively. The normal group was randomly divided into 15 normal group (NG) and the model group was 70. The normal group was given ordinary feed and the model group was given high glucose and high fat feed for.12 weeks, and the model rats were fasting and could not help water. Secondary intraperitoneal injection of STZ (35mg/kg). The rats in the normal group were injected with the corresponding volume of citric acid buffer.72h after the injection of the caudal vein to measure blood glucose, and the blood glucose was more than 16.7mmol/L for DM. Two deaths were made during the process of modeling, and the other one was eliminated. The rat model rats were randomly divided into model group (MG), Chinese medicine group (ZG), Western Medicine (EL). The group (XG) and the group (JG) group were given the corresponding medicine in each group. The normal group and the model group were given a considerable amount of saline. Each group was given a total of 16 weeks. The body weight, blood sugar and urine protein were monitored for fourth weeks, eighth weeks and twelfth weeks respectively. After sixteenth weeks of fasting, 24 small rats were left after fasting 12h. In the urine, the urine protein was measured in 24 hours. Under the anesthetic state, the abdominal aorta was taken blood, the serum was separated, the biochemical indexes were measured and the renal tissue was retained for light microscopy, electron microscopy, immunohistochemical and Real-timePCR detection.
Result锛

本文编号：1947479