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白头翁醇提物对TNBS诱导大鼠结肠炎中性粒细胞弹性蛋白酶作用的影响

发布时间:2018-07-31 05:12
【摘要】:目的:探讨白头翁醇提物对三硝基苯磺酸(trinitro-benzen-sulfonicacid, TNBS)诱导大鼠结肠炎中性粒细胞弹性蛋白酶(Neutrophil elastase,NE)作用的影响。 方法:建立大鼠结肠炎模型,SD大鼠28只,分为TNBS诱导大鼠结肠炎模型组(TNBS模型组,n=10)、白头翁醇提物治疗组(白头翁组,n=10)、正常对照组(正常对照组,n=8)。TNBS诱导大鼠结肠炎模型:SD大鼠予禁食不禁饮24小时,2%戊巴比妥钠注射液(2.3ml/kg)腹腔注射麻醉大鼠后,TNBS模型组、白头翁组分别用一直径约2mm、长约12cm的用石蜡油润滑的硅胶管由肛门缓慢插入约8cm左右,以含80mg/kg TNBS的等体积50%乙醇溶液约0.85ml轻轻注入结肠,数秒内灌完,使肛门向上呈45°倾斜,持续约3-5分钟,防止药液倒流,促进吸收,然后保持大鼠平躺状态,待其自然清醒,放回饲养笼中。正常对照组在相同的麻醉条件下予以同等量生理盐水注入作为对照,其余过程均与前相同。 结肠炎造模成功后,正常对照组、TNBS模型组每只每天均用1ml的蒸馏水灌肠一次,持续7天;白头翁组各只大鼠1-7天之内每天用白头翁醇提物灌肠,白头翁醇提物用量按2g/kg用蒸馏水配制成1ml。各组大鼠正常饲养,给予自由饮水和同样颗粒装食物。每天观察各组大鼠的活动、体重及大便性状变化等情况。于第8天对各组行2%的戊巴比妥钠麻醉,待麻醉满意后,取眼眶内眦静脉血ELISA法测定血浆D-乳酸、NE及血清TNF-α、IL-8。然后断颈处死所有大鼠,取下整段结肠并纵向剪开,用生理盐水冲洗结肠内污物并观察整段结肠有无溃疡、有无充血水肿及活动性出血等;每只大鼠取相同部位结肠组织,分成两部分,一部分取长约2cm,用福尔马林液固定,用于HE染色,,同时进行疾病活动指数(DAI)和病理组织学损伤评分;另一部分标本用3%的戊二醛固定型电子透镜观察结肠组织超微结构改变情况。 结果:(1)一般情况:大鼠动物造模24小时后出现精神萎靡,活动和摄食较前明显减少,对外周刺激反应减弱,体质量逐渐下降,部分大鼠出血腹泻伴肉眼便血或粪便隐血阳性。TNBS模型组前4天腹泻较重,毛发蓬松,质脆,后3天逐渐腹泻逐渐缓解,食量和体质量稍有增加;白头翁组与TNBS模型组相比,饮食、活动逐渐增多,体质量缓慢增加,精神好转,腹泻逐渐减轻,症状明显改善,大便较成形,血便多表现为隐血阳性,体质量减轻不明显。在组织学上模型组结肠黏膜上皮坏死脱落,黏膜、黏膜下和基层可见淋巴细胞、浆细胞浸润,腺体断裂、结构紊乱,杯状细胞丢失,隐窝脓肿形成,可见多个溃疡,溃疡深达固有肌层。白头翁组光镜下可见黏膜下炎症细胞浸润少,溃疡多累及黏膜下层,腺体结构改善,溃疡面被增生的边缘上皮细胞覆盖,肉芽组织纤维化改变。(2)疾病活动指数(DAI):TNBS模型组、白头翁组和正常对照组DAI分别是8.80±3.04、5.10±1.85和1.00±0.74,组织学损伤评分分别为4.00±2.16、2.70±1.15和0.37±0.51,与正常对照组比较差异均具有显著性(P0.05)。(3)血清中TNF-α、IL-8和血浆中NE、D-乳酸含量:TNBS诱导大鼠结肠炎后,血清TNF-α水平、IL-8升高、血浆中NE、D-乳酸水平升高,但经白头翁醇提物处理后,血浆NE水平、血清TNF-α水平、血清IL-8水平和D-乳酸水平均降低(P0.05)。(4)透射电镜下可见TNBS模型组肠绒毛稀疏,排列不规整,线粒体肿胀,粗面内质网扩张,核糖体丢失并且有空泡形成。偶见细胞核染色质边集。白头翁组与TNBS模型组比较略有改善,与正常组比较仍有差异。 结论:白头翁醇提物对IBD具有明显的抗炎作用,其可能的作用机制是:通过白头翁醇提物对NE释放的抑制,进一步抑制炎症介质级联反应,达到抗炎效果。
[Abstract]:......
【学位授予单位】:川北医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:R285.5

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本文编号:2154518

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