右归丸调控FNDC5缺失小鼠骨—脂代谢的初步研究

发布时间：2018-10-17 11:54

【摘要】：目的:构建FNDC5缺失模型,明确FNDC5缺失对骨-脂代谢的影响,探讨补肾方剂右归丸上调FNDC5改善骨-脂代谢的作用和机制。方法:1、采用Talen技术构建FNDC5基因缺失模型,通过提取DNA、PCR扩增、基因测序等方法,确定模型的构建是否成功,并通过荧光定量PCR检测肌肉中FNDC5的表达;2、将构建成功的小鼠模型进行分组,分为野生组、FNDC5缺失组、右归丸+FNDC5缺失组,每组8只,雌雄各半。右归丸组按16.65g/kg每日灌胃,灌胃4周,野生组、FNDC5缺失组每日灌胃生理盐水。4周后2%水合氯醛麻醉后取材;3、各组小鼠血清进行Irisin的ELISA检测;4、右归丸对FNDC5缺失小鼠脂代谢的作用:对各组小鼠称重,检测血中甘油三酯(TG)含量,提取皮下脂肪 RNA,RT-qPCR 检测 FNDC5、PGC-1a、UCP1 mRNA 的表达,免疫荧光检测脂肪UCP1蛋白的表达;5、右归丸对FNDC5缺失小鼠骨代谢的作用:血清碱性磷酸酶(ALP)活力分析;micro-CT检测各组小鼠骨密度和骨微细结构,HE染色观察各组小鼠形态学变化,提取股骨 RNA,Real-time PCR 检测 FNDC5、Runx2 mRNA 的表达。结果:1、成功构建FNDC5缺失模型,肌肉中FNDC5 mRNA表达量明显降低(P0.01)。2、各组小鼠血清进行Irisin的ELISA检测结果:与野生组比较,FNDC5基因缺失小鼠的血中Irisin蛋白含量明显降低(P0.01);与FNDC5缺失组比较,右归丸组血中Irisin蛋白含量显著升高(P0.01)。3、右归丸对FNDC5缺失小鼠脂代谢的作用:(1)与野生组比较,FNDC5缺失组在各时间点的体重无明显差异。右归丸组从第4周开始干预,与FNDC5缺失组比较,雌性小鼠中,右归丸组从药物干预开始体重明显降低,在第5周,体重虽无统计学差异但有下降趋势;第6、7、8周,体重较FNDC5缺失组显著降低,且具有统计学差异(P0.01);雄性小鼠中,右归丸组从药物干预开始体重较FNDC5缺失组虽无统计学差异,但有降低的趋势;(2)与野生组比较,雌、雄小鼠FNDC5缺失组血清中TG含量明显升高(P0.01);与FNDC5缺失组比较,右归丸组血清中TG含量显著降低(P0.01);(3)与野生组比较,FNDC5缺失组雌、雄小鼠皮下脂肪中FNDC5 mRNA的表达均明显降低(P0.05),PGC-1a和UCP1 mRNA的表达均显著升高(P0.05和P0.01);与FNDC5缺失组比较,右归丸组雌、雄小鼠FNDC5的表达显著升高(P0.05)。在雌性小鼠中,右归丸组UCP1的表达明显高于FNDC5缺失组(P0.01);在雄性小鼠中,右归丸组UCP1的表达同样显著高于FNDC5缺失组(P0.05)。而右归丸组雌、雄小鼠PGC-1a的表达与FNDC5缺失组相比,无统计学差异;(4)在免疫荧光中,野生组UCP1表达荧光较弱,且脂肪细胞数量较少,脂滴较大;与野生组比较,FNDC5缺失组UCP1荧光表达明显增强,且脂肪细胞数明显增多,脂滴较小;与FNDC5缺失组比较,右归丸组UCP1表达增多,脂肪细胞密集,脂滴较小。4、右归丸对FNDC5缺失小鼠骨代谢的作用:(1)与野生组比较,雌、雄小鼠FNDC5缺失组血中ALP活力明显降低(P0.01);与FNDC5缺失组比较,右归丸组血清中ALP活力明显升高;(2)在雌性小鼠中,与野生组比较,FNDC5缺失组tBMD、TbBMD、Tb.Th 均明显降低(P0.01),Tb.Sp 明显升高(P0.01)。与 FNDC5 缺失组比较,右归丸组tBMD、TbBMD、Tb.Th均明显升高(P0.05、P0.01和P0.05),Tb.Sp明显降低(P0.01);在雄性小鼠中,与野生组比较,FNDC5缺失组tBMD,Tb.Sp未见明显差异,TbBMD、Tb.Th虽无统计学差异,但有下降的趋势;与FNDC5缺失组比较,右归丸组Tb.Sp无统计学差异;tBMD,TbBMD、Tb.Th虽无统计学差异,但有上升趋势。(3)HE染色结果可知,野生组可见骨小梁结构完整、致密,骨小梁周围骨细胞分布均匀;在雌性小鼠中,与野生组比较,FNDC5缺失组可见骨小梁数量明显减少、稀疏,骨小梁断裂,排列紊乱、不连续,骨小梁间距明显增宽,形成空洞;骨细胞数量明显减少;与FNDC5缺失组比较,雌性小鼠右归丸组骨小梁排列明显整齐,结构完整,骨细胞明显增多,但与野生组比较仍可见骨小梁裂痕。在雄性小鼠中,与野生组比较,FNDC5缺失组偶见骨小梁断裂,排列较稀疏,骨小梁周围骨细胞减少;与FNDC5缺失组比较,右归丸组骨小梁排列紧密,结构完整,骨细胞数量增加。(4)在雌性小鼠中,与野生组比较,FNDC5缺失组FNDC5与Runx2 mRNA的表达明显降低(P0.01);与FNDC5缺失组比较,右归丸组FNDC5与Runx2 mRNA的表达明显升高(P0.05和P0.01)。在雄性小鼠中,与野生组比较,FNDC5缺失组FNDC5、Runx2 mRNA的表达虽无统计学差异,但有下降的趋势;与FNDC5缺失组比较,右归丸组FNDC5、Runx2 mRNA的表达虽无统计学差异,但有上升的趋势。结论:本研究成功构建了 FNDC5基因缺失模型,并发现FNDC5缺失后,骨代谢与脂代谢均发生异常,而右归丸能够改善骨-脂代谢的异常,而FNDC5可能是右归丸的作用靶点。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 占风香;;右归丸的临床应用[J];社区医学杂志;2009年21期

2 耿俊英;任天池;;保肾名方,左右归丸[J];家庭医药;2007年10期

3 杨兴全;右归丸加味治疗阳萎46例观察[J];实用中医药杂志;2003年02期

4 朱锦祥;右归丸加味治疗阴茎勃起功能障碍30例[J];福建中医药;2005年03期

5 冯建华;刘玉健;;右归丸加味治疗老年甲状腺功能减退症[J];山东中医药大学学报;2006年01期

6 赵丽颖;夏天;宋文嘉;;右归丸的现代研究进展[J];吉林中医药;2012年04期

7 陆惠;丁青;;右归丸现代药理研究新进展[J];湖南中医药大学学报;2012年06期

8 杨玲;张力华;张作涛;吴春朋;;右归丸诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经样细胞的研究[J];神经解剖学杂志;2012年04期

9 张浩玲;曾军秀;石莹莹;韩敏;傅大莉;唐大轩;谭正怀;;右归丸预防哮喘复发的原理探讨[J];中药药理与临床;2012年06期

10 秦梦;陈元川;郭海玲;段铁骊;赵咏芳;沈雪勇;詹红生;;左归丸、右归丸对成骨细胞骨硬化蛋白的影响[J];中华中医药杂志;2013年08期

相关会议论文 前10条

1 郑霞;邓延莉;李启佳;陆华;;应用红外热像诊断系统评价左右归丸药物靶向性的研究[A];第八届全国中西医结合妇产科学术大会论文及摘要集[C];2012年

2 郑平东;;右归丸治疗睾丸功能损害的实验研究[A];'97中医药博士论坛：中医药现代研究与未来发展[C];1997年

3 常林;;右归丸在耳鼻咽喉口齿科的临床运用[A];世界中联耳鼻喉口腔专业委员会换届大会及第三次学术年会暨中华中医药学会耳鼻喉科分会第十七次学术交流会暨广东省中医及中西医结合学会耳鼻喉科学术交流会论文汇编[C];2011年

4 杨铸;卞琴;赵永见;唐德志;杨洲;杨峰;刘书芬;卢盛;施杞;王拥军;;左归丸、右归丸加减方对去卵巢骨质疏松小鼠的疗效比较和基因芯片分析[A];第十九届全国中西医结合骨伤科学术研讨会论文汇编[C];2012年

5 忻耀杰;滕磊;高旭青;;血府逐瘀口服液联合右归丸治疗变应性鼻炎的临床观察[A];世界中联耳鼻喉口腔科专业委员会第五届学术年会、中华中医药学会耳鼻喉科分会第十九届学术交流会暨贵州省中西医结合学会耳鼻咽喉分会第二次学术交流会论文汇编[C];2013年

6 宋囡;何文智;王智民;任艳玲;;左、右归丸及其拆方对骨髓间充质干细胞成骨分化后细胞周期和凋亡的影响[A];第四届全国中医药博士生优秀论文专辑[C];2013年

7 姚成芳;蔡生业;王丽;周宪宾;张建;;氢化可的松诱导Th1/Th2类细胞因子漂移现象的遗传背景差异及中药右归丸的逆转作用[A];中国中西医结合学会第七次全国实验医学学术研讨会论文汇编[C];2004年

8 寇爽;赵晖;李明;樊永平;王蕾;;左归丸和右归丸调控EAE大鼠轴突再生抑制因子信号通路相关分子的实验研究[A];2012中国医师协会中西医结合医师分会神经病学专家委员会学术年会论文汇编[C];2012年

9 周莉;;左归丸与右归丸对EAE大鼠血浆Th1/Th2平衡的影响[A];北京中医药学会络病专业委员会2010学术年会青年论坛暨急性冠脉综合征（ACS）规范化治疗与中西医结合治疗进展培训班学术论文集[C];2010年

10 戴薇薇;金国琴;张学礼;王亚娟;徐品初;;左归丸、右归丸对衰老大鼠海马学习记忆相关基因BDNF及其受体Trk B mRNA表达的影响[A];华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集[C];2006年

相关重要报纸文章 前10条

1 王豪;右归丸的新用途[N];民族医药报;2004年

2 王豪;话说右归丸[N];上海中医药报;2003年

3 郝继亭;右归丸用途拓展[N];中国医药报;2004年

4 贡军;叫停：不辨阴阳用中药[N];卫生与生活报;2004年

5 本报编辑部;《右归丸的新用途》补充[N];民族医药报;2004年

6 明秀;六味地地黄丸和右归丸的区别[N];民族医药报;2008年

7 主任医师 方雪;六味地黄丸和右归丸的区别[N];卫生与生活报;2007年

8 副主任医师 林中;服补肾药不宜“左右开弓”[N];医药养生保健报;2004年

9 杨超;服补肾药不宜“左右开弓”[N];中国医药报;2007年

10 金玲;女性也需要“壮阳”[N];医药养生保健报;2007年

相关博士学位论文 前6条

1 冀晓敏;从神经导向因子探讨右归丸“阴中求阳”促进EAE小鼠神经再生的作用机制[D];首都医科大学;2016年

2 付小卫;基于破骨细胞和成骨细胞调控通路探讨左、右归丸对不同性别去势大鼠骨质疏松症的作用差异及其机制[D];中国中医科学院;2014年

3 于化新;右归丸对肾阳虚型慢性肾衰大鼠肾脏AQP2表达影响及机制研究[D];辽宁中医药大学;2009年

4 徐灿坤;右归丸对实验性甲减大鼠骨骼肌及心肌GluT-4和甲状腺滤泡细胞bcl-2/bax表达的影响[D];天津医科大学;2006年

5 宋囡;基于MAPK/TGF-β1/Smads信号级联研究左、右归丸促骨髓间充质干细胞的成骨机制[D];辽宁中医药大学;2014年

6 张诏;肾气丸与右归丸对肾阳虚大鼠生精功能及RAAS影响的比较研究[D];山东中医药大学;2010年

相关硕士学位论文 前10条

1 黄真花;基于阴阳寤寐学说的左、右归丸对模型大鼠褪黑素、组胺的影响[D];福建中医药大学;2015年

2 谢乐;基于E_2、P水平与其受体相关性探讨左右归丸逆转化疗致POF时效机制[D];陕西中医药大学;2015年

3 何丽娟;左、右归丸及其拆方干预去卵巢大鼠BMSCs成骨诱导的实验研究[D];辽宁中医药大学;2015年

4 史年刚;右归丸延缓阳虚小鼠衰老进程的多靶点研究[D];成都中医药大学;2015年

5 王景龙;从大鼠血清性激素水平探讨左右归丸早期阻逆化疗致POF的效应机制[D];陕西中医药大学;2016年

6 周珊;甲减的血清核磁共振代谢组学研究及不同剂量右归丸疗效对比[D];广州中医药大学;2016年

7 姜文萍;埋线联合右归丸治疗肾虚型卵巢功能减退的临床观察[D];南京中医药大学;2016年

8 陈叶香;右归丸干预肾间质纤维化的作用及机制研究[D];南京中医药大学;2016年

9 李书娟;左、右归丸及其拆方调节去卵巢大鼠脂质代谢的研究[D];辽宁中医药大学;2016年

10 顾全;右归丸加减方治疗肝肾亏虚型骨质疏松症的临床观察[D];黑龙江中医药大学;2017年

，

本文编号：2276575